ÃÑ 16ÆäÀÌÁö

13ÆäÀÌÁö º»¹®½ÃÀÛ

11
´ßµµÃàÀåµµ°èÀ°ÀÇ»ì¸ð³Ú¶óÀ§»ý°ü¸®Áöħ
¨ç ÁßÇÕÈ¿¼Ò¿¬¼â¹ÝÀÀ¹ý(PCR¹ý)
ÀϹÝÀûÀÎ ÁßÇÕÈ¿¼Ò¿¬¼â¹ÝÀÀ¹ý°ú ½Ç½Ã°£ ÁßÇÕÈ¿¼Ò¿¬¼â¹ÝÀÀ¹ý(real-time
PCR¹ý)À¸·Î ´ßµµÃàÀå ½Ã·áÀÇ »ì¸ð³Ú¶ó±Õ ¿À¿°À» ½Å¼ÓÇÏ°Ô È®ÀÎÇÒ ¼ö ÀÖÀ¸¸ç,
Çã°¡µÈ ½ÃÆÇ °Ë»çŶƮ°¡ ÀÌ¿ë°¡´ÉÇÏ´Ù.
¨è µî¿ÂÀ¯ÀüÀÚÁõÆø¹ý(LAMP¹ý)
ÀÌ °Ë»ç¹ýÀº ´ßµµÃ¼ ¸°½º¾× µî¿¡¼­ »ì¸ð³Ú¶ó±Õ(invA À¯ÀüÀÚ)À» °ËÃâÇϱâ
À§ÇÑ ½Å¼ÓÇÑ À¯ÀüÀÚ°Ë»ç¹ýÀÇ Çϳª·Î °í°¡ÀÇ À¯ÀüÀÚ°Ë»ç Àåºñ°¡ ¾ø´Â °£ÀÌ
½ÇÇè½Ç¿¡¼­µµ ¼öÇàÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. ¶ÇÇÑ, PMA ¹× LED ÀåÄ¡¸¦ ÀÌ¿ëÇÒ °æ¿ì, ¼Òµ¶ÀÌ
ºó¹øÈ÷ ÀÌ·ç¾îÁö´Â ´ßµµÃàÀå ȯ°æ¿¡¼­ »ì¸ð³Ú¶ó »ý±Õ¸¸À» È®ÀÎÇÒ ¼ö ÀÖ´Â ÀÕÁ¡ÀÌ
ÀÖ´Ù.
a. °Ë»ç Àç·á
- ´ßµµÃ¼ ¸°½º¾×(¶Ç´Â ¸°½º¾× µîÀÇ 4~5½Ã°£ ¿¹ºñÁõ±Õ¾×)¿¡¼­ºÎÅÍ ÃßÃâÇÑ DNA
- »ì¸ð³Ú¶ó »ý±Õ °ËÃâÀ» À§ÇÑ ½Ã·á Àüó¸®(¼±ÅûçÇ×)
1) Propidium monoazide(PMA)¸¦ ÃÖÁ¾ ³óµµ 100 ¥ìMÀÌ µÇµµ·Ï ÷°¡
2) ¾Ï½Ç³» 1000 lmÀÇ LED Àüµî ¾Æ·¡(2.5 cm)¿¡¼­ 20ºÐ°£ Á¤Ä¡ ¹ÝÀÀ
b. ¹ÝÀÀ¾× Á¶¼º
¹ÝÀÀ¾× I
¹ÝÀÀ¾× II
Reagents
Amount
Reagents
Amount
2XReactionMix.(RM)
12.5§¡
IsothermalMasterMix
15 §¡
FIP(20pmol)
2§¡
FIP(1.6mM)
2 §¡
BIP(20pmol)
2§¡
BIP(1.6mM)
2 §¡
F3(20pmol)
1§¡
F3(0.8mM)
1 §¡
B3(20pmol)
1§¡
B3(0.8mM)
1 §¡
LoopF(20pmol)
0.25§¡
LoopF(0.2mM)
0.25 §¡
LoopB(20pmol)
0.25§¡
LoopB(0.2mM)
0.25 §¡
BstDNApolymerase
1§¡
DistilledWater(DW)
1.5 §¡
DNAtemplate
FluorescentDetectionReagent(FD)
1§¡
2 §¡
Total
25 §¡
DistilledWater(DW)
2§¡
DNAtemplate
2§¡
Total
25§¡
LAMP¿ë ±â±â »ç¿ë¿©ºÎ ¹× Á¾·ù¿¡ µû¶ó ¼±Åûç¿ë. ¹ÝÀÀ¾× II´Â Isothermal
*
MasterMix(OptiGeneÞä) »ç¿ë½ÃÀÇ Á¶¼ºÀ» ³ªÅ¸³¿.

13ÆäÀÌÁö º»¹®³¡



ÇöÀç Æ÷Ä¿½ºÀÇ ¾Æ·¡³»¿ëµéÀº µ¿ÀÏÇÑ ÄÁÅÙÃ÷¸¦ °¡Áö°í ÆäÀÌÁö³Ñ±è È¿°ú¹× ½Ã°¢Àû È¿°ú¸¦ Á¦°øÇÏ´Â ÆäÀÌÁöÀ̹ǷΠ½ºÅ©¸°¸®´õ »ç¿ëÀÚ´Â ¿©±â±îÁö¸¸ ³¶µ¶ÇϽðí À§ÀÇ ÆäÀÌÁöÀ̵¿ ¸µÅ©¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© ´ÙÀ½ÆäÀÌÁö·Î À̵¿ÇϽñ⠹ٶø´Ï´Ù.
»ó´Ü¸Þ´º ¹Ù·Î°¡±â ´ÜÃàÅ°¾È³» : ÀÌÀüÆäÀÌÁö´Â ÁÂÃø¹æÇâÅ°, ´ÙÀ½ÆäÀÌÁö´Â ¿ìÃø¹æÇâÅ°, ùÆäÀÌÁö´Â »ó´Ü¹æÇâÅ°, ¸¶Áö¸·ÆäÀÌÁö´Â ÇϴܹæÇâÅ°, ÁÂÃøÈ®´ëÃà¼Ò´Â insertÅ°, ¿ìÃøÈ®´ëÃà¼Ò´Â deleteÅ°