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- 발색액 : OPD stock sol.에 3% H2O2를 200배 희석 사용.
표
⑥ 반응정지용액 : 932㎖의 증류수에 68㎖의 농축황산(18M)을 천천히 혼합 후 실온
준
보관 및 사용. 다만 황산을 넣고 증류수를 혼합하지 말 것.
기
술
(2) 항원 및 항체 (영국 퍼브라이트 연구소제작, 킷트 내에 포함)
활
① Trapping/ Detecting antibody Stock : 0.5㎖의 정제수 (Reconstitution diluent
용
#1)에 녹인다. (4℃ 보관)
② Anti-Species conjugate Stock : 1㎖의 sterile glycerol/water (Reconstitution
diluent #2)에 녹인다. (-20℃ 보관)
③ Antigen Stock (BEI 불활화 바이러스 항원) : 2㎖의 sterile glycerol/water
(Reconstitution diluent #2)에 녹인다. (-20℃ 보관)
(3) 실험기구
① 10-200㎕ 정량이 가능한 multi-micorpipette 및 피펫팁, orbital shaker
② 코팅플레이트(kit내 포함, Maxisorp ELISA plate)
③ ELISA 리더기
④ 시료희석을 위한 튜브
⑤ 자동세척기
(4) 공여 시료 : 감수성동물의 조직 유제액(PBS를 넣고 조직을 유발에 갈아 10% 유제액
을 만듦), 수포액 및 세포배양액
3) 실험 방법
(1) 냉장 보관된 rabbit antibody를 coating buffer에 1:1000으로 희석하여(각 혈청형 별
동일한 비율로 희석) NUNC maxisorp 96 well plate에 50㎕씩 첨가한다. 37℃ 1시간
shaking incubation하거나 혹은 4℃ overnight incubation 한다.
(2) 세척액으로 마이크로플레이트를 5회 세척하고, 항원을 분주한다.
① Blank값을 위해 Diluent buffer A 50㎕를 blank wells인 첫 번째부터 여덟 번째
줄까지의 매 5, 6번 wells 에 항원대신 넣는다.
② 표준항원의 경우 Diluent buffer A 50㎕를 첫줄 첫 번째 well부터 4번째 well까
지 넣고 표준 항원 12.5㎕을 첫 번째 well에 넣고 mixing 후 다시 12.5㎕를 두
번째 well에 연속하여 넣는 식으로 단계 희석한다. 마지막 네번째 well에서는
mixing 후 12.5㎕를 버린다(5배, 25배, 125배, 625배 희석)
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