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1-2-1-03
각각 이식하고
37
에서
18
20
시간 진탕배양한다
Erysipelothrix rhusiopathiae
균은 종균 배양액을
10%
송아지 혈청이 함유된
BHI broth
에 이식
37
에서
48
시간 배양한다
. (24
시간 배양 시 균수
/ml 이상),
Escherichia coli
는 종균 배양액을
배지에 이식하여
37
에서
18 24
Minca medium
에서는
36
48
시간을 각각 배양한다
3.2.3.
집균
Bordetella bronchiseptica
Pasteurella multocida
균 및
균은 배양된 룩스병에
적당량의 멸균된 생리적 식염수와 초자구를 함께 넣고 흔들어 완전히 집균한다.
집균된 균액은 1
20
목동망 및
3
통과케 하여 한천편을 제거한 다음
군괴의 세분과 균질화를 위해 초자구를 넣은 용기에서 흔들어 진탕하며 각
균주별로 집균액의 일부를 채취하여 원액검사에 사용하고 나머지는 항원농도를
조절한 후 불활화 시킨다.
Erysipelothrix rhusiopathiae
균은 충분히 배양되고 잡균 혼입이 없는 균액을
100
목동망으로 여과하여
채균한다.
Escherichia coli
는 잡균의 오염 유무와
pilus
생성 여부를 확인
(MRHA
시험
한 후
Minca medium
배양균은
5
에 보존한다
3.2.4.
불활화
Bordetella bronchiseptica
Pasteurella multocida
균 및
균은 포르말린을 0.3%
가하고 실온에서
3
일간 정치 가끔 흔들어줌
하여 불활화 시킨다
Erysipelothrix rhusiopathiae
균은 집균액에 포르말린을
0.3%
되게 첨가
시킨 후 실온에서
24
시간 정치하
여 불활화 시킨다.
Escherichia coli
배양 집균액의 경우 포르말린을
0.3%
가하여
실온에서
3
3.2.5.
Escherichia coli pilus
분리 및 정제
Escherichia coli
균은
Minca medium
에 배양 집균하여
5℃
에 보존된 균
체를 각 균주별로 본 배양시 용량의
1/10
에 부유시켜
60
에서
20
분간
열처리 후
5
에서 원심분리
(17,000xg, 20
분 하여 상층액을 수집한 후 이
상층액을 2
～ ℃로 유지하면서
5
ammonium sulfate
을 포화상태가 될 때까지
magnetic bar
를 회전시키며 서서히 가한다
침전된
pilus
를 원심분리

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