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1-2-1-03
<
별첨
1> Mannose-resistant hemagglutination inhibition(MRHI)
시험
1) Mannose-resistant
혈구응집억제반응
(MRHA)
에 의한 항원 사용량 측정
대장균
pilus
형 마이크로플레이트에서
50
용량으로
2
는 동량의
2%
말 혈구
, K88, F41
1%
기니픽 혈구를 넣어
5
에서
3
반응시킨 후 혈구응집가를 측정한다.
2)
혈구응집억제반응
(MRHI)
가검혈청
50
형 마이크로플레이트에서
2
K99, K88
항원
(4HA,
별첨
1-1.)
을 각각 넣고
37
30
분 동안 반응시
킨 후
항원에는
2%
말 혈구
, K88, F41
에는
1%
기니픽 혈구를
100㎕
각 가하여
5
에서
3
3)
술식은 아래와 같다
구분
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
혈청희석배수
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:12 1:25 1:51 1:102 1:204 1:409
희석액(0.5%
50 50 50 50
50
50
50
50
50
50
50
50㎕
Mannose PBS)
혈청(A)
50 50 50 50
50
50
50
50
50
50
50
50㎕
혈청(B)
50 50 50 50
50
50
50
50
50
50
50
50㎕
4HA K99
항원
(A') 50 50 50 50
50
50
50
50
50
50
50
50㎕
4HA K88,
50 50 50 50
50
50
50
50
50
50
50
50㎕
항원
(B')
반응
37
30
분간
2%
말 혈구
＂ 100 100 10 100 100 100 100 100 100
100
100 100㎕
1%
기니픽
10
100 100
100 100 100 100 100 100
100
100 100㎕
혈구(B
반응
5
3
시간
판독
육안으로 혈구응집 억제가 판독

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