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1-4-1-03
3.2.1.
종균배양
종균을 멸균식염수에 용해하여
배지에 이식하고
37
에서
48
시간
배양하여 단독집락을 선택하여
배지에 이식하여
37
에서
24
시간 진
탕 배양한다.
3.2.2.
본배양
제조용 배지를
fermentor
에 완전히 용해 후 배양기에 분주하고
121℃
에서
20
분간 고압증기멸균하고 냉각수를 이용하여
37℃
를 유지하면서 배양한기에
종균배양액을 배지량의
1%
되게 접종하고
37
에서
18
24
시간 배양한다
3.2.3.
집균
종균을 접종한 후
37
에서
18
24
시간 배양한 후 잡균의 혼입여부를 관찰
한 후 연속원심분리기(Sharples centrifuges, TOMOE)를 사용하여 균체만을 수
집하고 멸균 phosphate buffered saline(PBS)으로 균 배양액이
1/20
양으로 되게
재 부유한다.
3.2.4.
불활화
3.2.4.1.
균체 불활화
집균하여 재 부유한 균액에 포르말린을
0.3%
첨가하여
37
에서
72
시간
불활화한다.
3.2.4.2. Toxin(crude dermonecrotising toxin : cDNT)
의 분리 및 불활화
집균하여
부유한
균액을
초음파
분쇄기를
사용하여
분쇄한
8.000rpm
에서
30
분간 원심분리하고 그 상층액을
cDNT
를 함유한 원액으
로 한다 원심분리 한 상충액의 일부는
protein
농도측정에 사용하고 나머
지는 포르말린을
0.5%
첨가하여
37
에서
72
시간 불활화한다
3.3.
원액검사
3.3.1.
순수시험
동물용 생물학적제제 일반시험법
-3
에 의한 검사에 따른다
3.3.2.
무균시험
동물용 생물학적제제 일반시험법
-5
에 의한 검사에 따른다
3.3.3.
불활화 확인시험
3.3.3.1.
균체의 불활화 확인시험
3.3.3.1.1.
재료 및 시험

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