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③ 가검 시료는 부유희석상태로 직접 50㎕씩 7열에서 12열 사이에 반복으로 넣어서
연
반응
구
성
과
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
활
A
O(1/5)* (1/25)* (1/125)* (1/625)* blank
용
blank Sample Sample Sample Sample Sample Sample
집
B
A
C
C
D
Asia 1
E
SAT1
F
SAT2
G
SAT3
H
SVD
* 표준항원(희석배수)
(3) 37℃에서 1시간 shaking incubation하고 3회 세척하여 플레이트를 잘 털어준 뒤
Guinea pig antibody를 Diluent buffer B로 1:100 희석하여 50㎕ 씩 첨가하고 37℃에
서 1시간 shaking incubation 한다.
(4) 다시 3회 세척 후 Horseradish peroxidase-conjugated rabbit anti-guinea pig IgG를
Diluent buffer B로 1:200 희석하여 50㎕ 씩 첨가하고 37℃에서 40분간 shaking in
-cubation 한다.
(5) 3회 세척 후 한 plate 당 OPD stock solution 6㎖ 에 3% H2O2 30㎕을 혼합하여 50
㎕씩 첨가하고 15분간 실온에서 정치하면서 발색시킨다.
(6) 반응정지용액 (1.25M 황산용액)을 50㎕ 씩 넣고 엘라이자 리더기에서 492nm로 흡
광도를 측정한다.
4) 결과판독
(1) 흡광도가 background 대비 OD 값의 평균(Mean corrected OD)이 0.1 이상일 때에는 양성
반응으로 보며, 어느 행에서 반응이 있는가에 따라서 혈청형도 판단할 수 있다.
- Mean corrected OD
= Mean of (actual OD - mean background OD)
(2) 흡광도가 0.1에 근접하여 나타난 경우는 재실험이나 세포배양을 통해서 결과가 재확인되어
야 한다.
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