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마우스 배아줄기분화세포를 이용한 동물용의약품 등의 혈액독성 평가기법
연
구
성
1. 원리
과
활
용
본 기법은 마우스 배아줄기세포에서 조혈세포로 분화시키면서 분화관련 단백질인
집
CD117, CD34(조혈모세포지표), Gr-1(과립세포 지표), CD45(백혈구 지표), Ter119(적아
세포 지표)의 발현도를 지표로 하여 동물용의약품 또는 축산물중 유해화학물질이 혈액
세포독성에 미치는 영향을 신속, 간편하게 시험하는 기법임.
2. 시험방법
1) 시험재료
① 공시세포
- 마우스 배아줄기세포 (NVRQS ES-11F, 2006년 수의과학검역원 구축)
- OP9 feeder cell line
② 공시물질
- 시 험 물 질 : arsanilic acid, danofloxacin, lead nitrate
③ 공시배지
? 1차 조혈분화배지
: IMDM, 15% FBS(fetal bovine serum), 1% penicillin/streptomycin, 1% L-glutamin,
10 ㎍ /㎖ bovine insulin, 5 ㎍ /㎖ transferin, 5ng/㎖ sodium selenite, 50 ㎍ /㎖
ascorbic acid, 0.45 mM a-monothioglycerol, 20 ng/㎖ VEGF, 200 ng/㎖ IGF-II
? 2차 조혈분화배지
: IMDM, 15% FBS(fetal bovine serum), 1% penicillin/streptomycin, 1% L-glutamin,
10 ㎍ /㎖ bovine insulin, 5 ㎍ /㎖ transferin, 5ng/㎖ sodium selenite, 50 ㎍ /㎖
ascorbic acid, 0.45 mM a-monothioglycerol, 50 ng/㎖ SCF, 10 unit/㎖
-3
erythropoietin, 10 ng/㎖ IL-3, 10
mM dexamethasone
④ 기기 : 세포영상분석기(Cell imaging High Content Screening, Cellomics), 형광도립
현미경
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