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시험방법
가. NanoBiT 기반한 HiBiT-tagged Asia1형 구제역바이러스 유사 입자(VLP) 클론 제작
- 구제역바이러스Aisa1shamir의VP1유전자서열에표식자(HiBiT)유전자서열과P1-2A/3C유전
자 서열을 삽입하여 구제역 유사 바이러스 제작
- LgBiT, AS:HiBiT 발현 벡터를 형질전환 시킨 세포에서 각각의 LgBiT, HiBiT 단백질 발현 및 형광
발현을 확인함
NanoBiT 시스템 적용한 구제역바이러스 유사 입자(VLP) 제작
백
신
주
나. HiBiT-tagged Asia1형 구제역바이러스 유사 입자(VLP) 제작
분
- 일반실험실(BL2)에서 HKE 293T 세포에 제작된 유사바이러스 벡터를 이용하여 세포에 형질전환
석
(transfection)함.
및
- 형질전환 세포주의 상층액에서 바이러스 생산 및 확인함.
개
발
분
야
HiBiT-tagged Asia1형 구제역바이러스 유사 입자(VLP) 확인
다. NanoBiT 기반 구제역바이러스 유사 입자(VLP) 이용 중화항체 측정
- 기존 중화항체측정법(VNT) 방식은 혈청을 8배부터 1024배 혈청을 희석한 후 바이러스와 중화항
체의 결합을 CPE로 확인함
- 기존의 방식과 동일하게 Virus only well를 cut-off 기준으로 하여 중화항체 값을 측정함
·RLU 수치(duplicate: 2 well) ≥ cut-off →CPE 100% (진한색)
·RLU 수치(duplicate: 1 well) ≥ cut-off →CPE 50% (연한색)
·RLU 수치(duplicate: 0 well) ≥ cut-off →CPE 0% (흰색)
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