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?Arsanilicacid에의한50%유전독성발현농도(IC50)는근육세포에서20mM이었으나나머지
?우리원마우스배아줄기세포(NVRQS-ES11F)에서유래한배아암세포(NVRQS-EC),
배아생식세포 (NVRQS-EG)와 내배엽세포(Mouse hepatoma cell, Hep1.1), 중배엽세포
세포는100mM이상으로유전독성이관찰되지않았음
(Mouseembryonicfibroblastcell,ATCCCCL-92;Mousemusclecell,ATCCCCL-1772;
?Danofloxacin에의한50%유전독성발현농도(IC50)는혈액세포에서11mM이었으나나머지
Mouse myelomacell, ATCCHB-174), 외배엽세포(Mouse neuroblastoma cell, ATCC
세포는100mM이상으로유전독성이관찰되지않았음
CCL-147)를 이용하여 양성대조물질을 digitonin (300ug/ml)으로 하고 시험물질로서
2)인산화ATM및P53(DNAdamage)
methylnitrosourea (4pM~40mM), arsanilic acid (2pM~20mM), danofloxacin
?MNU에의한50%유전독성발현농도(IC50)는신경세포(2.5mM)>혈액세포(600mM)순으로강하였고
(0.1pM~1mM)을투여하여protease활성도및MTTassay를실시하여세포독성을
나머지세포는100mM이상이었음
평가하였음
?Arsanilicacid에의한50%유전독성발현농도(IC50)는간세포에서18mM이었고나머지
1)Protease활성도측정
세포는100mM이상이었음
?MNU에의한50%세포억제농도(IC50)는모든세포에서100mM이상이었음
?Danofloxacin에의한50%유전독성발현농도(IC50)는혈액세포(0.2mM)>간세포(0.43mM,)>
?Arsanilicacid에의한50%세포억제농도(IC50)는근육세포(7.6mM)>혈액세포(19.8mM)
신경세포(1.5mM)>배아줄기세포(15mM)순으로강하였고나머지세포는100mM이상이었음
순으로민감하였고나머지세포는모두100mM이상이었음
?Danofloxacin에의한50%세포억제농도(IC50)는3T3세포(0.19mM)>혈액세포(0.31mM)>
다.배아줄기세포유래배상체를이용한발생독성평가기법개발?확립및평가
배아줄기세포(4.8mM)순으로민감하였고나머지세포는100mM이상이었음
?우리원마우스배아줄기세포(NVRQS-ES11F)에서hangingdrop법으로만든배상체(NVRQS-EB)에서
2)MTTassay
양성대조물질을retinoicacid(0.1ug/ml) 하고methylnitrosourea(40nM~40mM),arsanilicacid
?MNU에의한50%세포억제농도(IC50)는혈액세포(2.3 >신경세포(18.2mM)순으로민감하였고
(2nM~2mM),danofloxacin(1nM~1mM))을투여하여배상체의세포분화능(heartbeatingrate)을
나머지세포는100mM이상이었음
측정함으로써발생독성을평가하였음
?Arsanili acid에의한50%세포억제농도(IC50)는혈액세포(4.1mM)>근육세포(15mM)>신경세포
?마우스배상체의MNU에의한50%세포분화능억제농도(IC50)는0.004mM이었음
(23.4mM)>배아생식세포(31mM)순으로민감하였고나머지세포는100mM이상이었음
?마우스배상체의arsanilicacid에의한 50%세포분화능억제농도(IC50)는0.00008mM이었음
?Danofloxacin에의한50%세포억제농도(IC50)는혈액세포(0.18mM)>근육세포(0.48mM)>
?마우스배상체의danofloxacin에의한 50%세포분화능억제농도(IC50)는0.006mM이었음
신경세포(0.73mM)>배아암세포(0.82mM)> 3T3세포(1.3mM)>배아줄기세포(3.1mM)>
마우스배아줄기세포,배아생식세포,배아암세포,배상체,배아분화세포,
간세포(3.8mM)순으로민감하였고배아생식세포는100mM이상이었음
5.색인용어
발생독성,세포독성,유전독성,동물용의약품
나.배아암세포,배아생식세포및분화세포를이용한유전독성평가기법개발?확립및평가
6.연구기간
2007.01～2010.12(4 년)
?우리원마우스배아줄기세포(NVRQS-ES11F)에서유래한배아암세포(NVRQS-EC),
과제책임자
정상희
(서명)
과 장
정갑수
(서명)
배아생식세포 (NVRQS-EG)와 내배엽세포(Mousehepatomacell,Hep1.1),중배엽세포
2009년 2 월
일
(Mouseembryonicfibroblastcell,ATCCCCL-92;Mousemusclecell,ATCCCCL-1772;
본 연구과제의 연차실적 보고서를 다음과 같이 제출합니다.
국립수의과학검역원장귀하
Mousemyelomacell,ATCCCRL-1580), 외배엽세포(Mouseneuroblastomacell, ATCC
CCL-147)를이용하여 양성대조물질을etoposide(100uM)로하고methylnitrosourea(4pM~40mM),
arsanil acid(2pM~20mM),danofloxacin(0.1pM~1mM)을투여하여DNAdoublestrandbreak시
발현되는핵내의인산화된H2AX와ATM및손상된DNA의증폭을차단하고복구시
발현되는인산화된p53의발현도를측정함으로써유전독성을평가하였음
1)인산화 H2AX(Doublestrandbreakage)
?MNU에의한50%유전독성발현농도(IC50)는신경세포(2.5mM)>배아암세포(70mM)
>혈액세포(300mM)순으로강하였고나머지세포는100mM이상으로유전독성이관찰되지
않았음
?우리원마우스배아줄기세포(NVRQS-ES11F)에서유래한배아암세포(NVRQS-EC),
배아생식세포 (NVRQS-EG)와 내배엽세포(Mouse hepatoma cell, Hep1.1), 중배엽세포
세포는100mM이상으로유전독성이관찰되지않았음
(Mouseembryonicfibroblastcell,ATCCCCL-92;Mousemusclecell,ATCCCCL-1772;
?Danofloxacin에의한50%유전독성발현농도(IC50)는혈액세포에서11mM이었으나나머지
Mouse myelomacell, ATCCHB-174), 외배엽세포(Mouse neuroblastoma cell, ATCC
세포는100mM이상으로유전독성이관찰되지않았음
CCL-147)를 이용하여 양성대조물질을 digitonin (300ug/ml)으로 하고 시험물질로서
2)인산화ATM및P53(DNAdamage)
methylnitrosourea (4pM~40mM), arsanilic acid (2pM~20mM), danofloxacin
?MNU에의한50%유전독성발현농도(IC50)는신경세포(2.5mM)>혈액세포(600mM)순으로강하였고
(0.1pM~1mM)을투여하여protease활성도및MTTassay를실시하여세포독성을
나머지세포는100mM이상이었음
평가하였음
?Arsanilicacid에의한50%유전독성발현농도(IC50)는간세포에서18mM이었고나머지
1)Protease활성도측정
세포는100mM이상이었음
?MNU에의한50%세포억제농도(IC50)는모든세포에서100mM이상이었음
?Danofloxacin에의한50%유전독성발현농도(IC50)는혈액세포(0.2mM)>간세포(0.43mM,)>
?Arsanilicacid에의한50%세포억제농도(IC50)는근육세포(7.6mM)>혈액세포(19.8mM)
신경세포(1.5mM)>배아줄기세포(15mM)순으로강하였고나머지세포는100mM이상이었음
순으로민감하였고나머지세포는모두100mM이상이었음
?Danofloxacin에의한50%세포억제농도(IC50)는3T3세포(0.19mM)>혈액세포(0.31mM)>
다.배아줄기세포유래배상체를이용한발생독성평가기법개발?확립및평가
배아줄기세포(4.8mM)순으로민감하였고나머지세포는100mM이상이었음
?우리원마우스배아줄기세포(NVRQS-ES11F)에서hangingdrop법으로만든배상체(NVRQS-EB)에서
2)MTTassay
양성대조물질을retinoicacid(0.1ug/ml) 하고methylnitrosourea(40nM~40mM),arsanilicacid
?MNU에의한50%세포억제농도(IC50)는혈액세포(2.3 >신경세포(18.2mM)순으로민감하였고
(2nM~2mM),danofloxacin(1nM~1mM))을투여하여배상체의세포분화능(heartbeatingrate)을
나머지세포는100mM이상이었음
측정함으로써발생독성을평가하였음
?Arsanili acid에의한50%세포억제농도(IC50)는혈액세포(4.1mM)>근육세포(15mM)>신경세포
?마우스배상체의MNU에의한50%세포분화능억제농도(IC50)는0.004mM이었음
(23.4mM)>배아생식세포(31mM)순으로민감하였고나머지세포는100mM이상이었음
?마우스배상체의arsanilicacid에의한 50%세포분화능억제농도(IC50)는0.00008mM이었음
?Danofloxacin에의한50%세포억제농도(IC50)는혈액세포(0.18mM)>근육세포(0.48mM)>
?마우스배상체의danofloxacin에의한 50%세포분화능억제농도(IC50)는0.006mM이었음
신경세포(0.73mM)>배아암세포(0.82mM)> 3T3세포(1.3mM)>배아줄기세포(3.1mM)>
마우스배아줄기세포,배아생식세포,배아암세포,배상체,배아분화세포,
간세포(3.8mM)순으로민감하였고배아생식세포는100mM이상이었음
5.색인용어
발생독성,세포독성,유전독성,동물용의약품
나.배아암세포,배아생식세포및분화세포를이용한유전독성평가기법개발?확립및평가
6.연구기간
2007.01～2010.12(4 년)
?우리원마우스배아줄기세포(NVRQS-ES11F)에서유래한배아암세포(NVRQS-EC),
과제책임자
정상희
(서명)
과 장
정갑수
(서명)
배아생식세포 (NVRQS-EG)와 내배엽세포(Mousehepatomacell,Hep1.1),중배엽세포
2009년 2 월
일
(Mouseembryonicfibroblastcell,ATCCCCL-92;Mousemusclecell,ATCCCCL-1772;
본 연구과제의 연차실적 보고서를 다음과 같이 제출합니다.
국립수의과학검역원장귀하
Mousemyelomacell,ATCCCRL-1580), 외배엽세포(Mouseneuroblastomacell, ATCC
CCL-147)를이용하여 양성대조물질을etoposide(100uM)로하고methylnitrosourea(4pM~40mM),
arsanil acid(2pM~20mM),danofloxacin(0.1pM~1mM)을투여하여DNAdoublestrandbreak시
발현되는핵내의인산화된H2AX와ATM및손상된DNA의증폭을차단하고복구시
발현되는인산화된p53의발현도를측정함으로써유전독성을평가하였음
1)인산화 H2AX(Doublestrandbreakage)
?MNU에의한50%유전독성발현농도(IC50)는신경세포(2.5mM)>배아암세포(70mM)
>혈액세포(300mM)순으로강하였고나머지세포는100mM이상으로유전독성이관찰되지
않았음
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