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표준 기술 활용 기술서
표
준
산란계 유래 가금티푸스균의 특성 조사 및 진단법 개
과 제 코 드
과 제 명
기
발 (Characterization of Salmonella Gallinarum Isolates
from Commercial Layers and Development of Improved
( 영 문 )
B-AD15-2009-10-01
술
Molecular Methods for Their Identification)
활
용
제 목
가금티푸스균과 추백리균의 감별동정용 유전자진단법
주담당자
강민수
직급
수의연구사
소속
조류질병과 조류세균연구실
담 당 자
권용국, 임춘태, 문운경, 박지용, 정병열, 권준헌
1. 현황 및 문제점
? 2001년 가금티푸스 생균백신 도입 후 전반적인 발병률의 감소에도 불구하고 일부 양
계농가에서 지속적 피해가 문제되고 있음.
? 가금티푸스균의 유전자형 분석에 PFGE법이 널리 사용되고 있으나 유전체 염기서열에
기초한 보다 정밀한 유전자형 분석법을 이용한 분자역학적 조사분석은 미흡한 실정임.
? 가금티푸스균의 정밀한 분자역학적 분석을 위해 개발된 유전자형 분석법인 MLVA법
의 보급을 통한 개량된 실험실적 기반기술 확립이 필요함.
2. 연구성과내용
? 유전체 염기서열이 결정된 가금티푸스균(287/91)과 Salmonella Enteritidis (P125109)
의 유전체 염기서열을 이용하여 각각 62개와 61개의 variable-number tandem
repeat(VNTR)부위를 확인하였고, 이를 토대로 가금티푸스균 유전자형 분석에 유용한
4개의 VNTR 부위(SGTR1~SGTR4)를 최종적으로 선발하였음.(Table 1)
Table 1. 가금티푸스균의 variable number tandem repeat(VNTR) 내역
Copy number
Period
TR
Consensus
size
SG
SE
Others
SGTR1
ACCCTCTT
8
13
7
V×
GCGGCGAAAGCGGCGGCGGAGGCGAAGA
SGTR2
45
11
8
V
AGAAAGCGGATGCCGAG
SGTR3
GTTGGTA
7
8.9
4.9
V
GTAGCGCCGCAGCCGCAGTATCAGCAGCCGCAG
SGTR4
39
7.3
9.3
V
CAGCCG
×V = variable.
? 선발된 4개의 VNTR부위를 증폭하기 위한 multiplex PCR 조건을 설정하였으며, 4개
의 다른 dye(6-FAM, VIC, NED, PET)가 각각 부착된 4개의 프라이머 세트를 이용하
여 설정된 조건의 PCR을 수행한후 fragment analysis를 수행하여 가금티푸스균 68주
에 대하여 총 26가지의 allelic profile을 확인하여 multi-locus VNTR analysis
377

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