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KOLAS 유전자변형생물체(LMO
) 실험 매뉴얼
증폭크기
증폭 대상
프라이머명
염기서열(5'-3')
비고
(AT)
T-35S_NNR1
5'-AGG GTT TCG CTC ACG TGT TG-3'
((61 ℃)
T-g7 F
5'-CAT CTA CGG CAA TGT ACC AG-3'
106 bp
Uni. 5
T-g7 R
5'-AAG TCA GGT ATT ATA GTC CAA GC-3'
(61 ℃)
T-ORF25 F
5'-CGG AGT GAG GGC CTC ATA TC-3'
198 bp
Uni. 5
T-ORF25 R
5'-CCG TTC TTA CAC CGG ACT GG-3'
(61 ℃)
NPTII-SSF1
5'-CGA TGC CTG CTT GCC GAA TA-3'
Selectable
141 bp
-
marker
(60 ℃)
NPTII-SSR1
5'-CAT TCG CCG CCA AGC TCT TC-3'
mEP-KF1
5'-ATG GCC GGC GCC GAG GAG AT-3'
144 bp
Herbicide
(60 ℃)
tolerant
mEP-KR1
5'-CAG CAG GTT ATC AAC CAC TG-3'
CP4EP-KF1
5'-ATG GGC GCC GAC ATC GAA GT-3'
202 bp
Herbicide
(60 ℃)
tolerant
CP4EP-KR1
5'-GGA GTT CTT CCA GAC CGT TCA T-3'
제초제내성
Ba-KF1
5'-ACC ACT ACA TCG AGA CAA GC-3'
유전자
258 bp
Herbicide
(60 ℃)
tolerant
Ba-KR1
5'-TCA GCA GGT GGG TGT AGA GC-3'
PA-KF1
5'-AGA TTA GGC CAG CTA CAG CA-3'
323 bp
Herbicide
(60 ℃)
tolerant
PA-KR1
5'-CGC CTC CAT AGA CTT AAG CA-3'
5.3. Multiplex PCR로 진행되는 LMO 스크리닝 PCR 검사는 Plutos社에서 판매하는 6종 키트를 이
용한다.
5.4. LMO 스크리닝 PCR용 kit의 반응조건
st
94 ℃
5 min
1
Denaturation
Denaturation
94 ℃
30 sec
35
제초제저항성 유전자,
60 ℃
30 sec
Annealing
cycles
내재, nptII
Elongation
72 ℃
30 sec
72 ℃
7 min
Final elongation
st
1
Denaturation
94 ℃
5 min
Denaturation
94 ℃
30 sec
40
Annealing
60 ℃
30 sec
Universal 1,2,3,4,5
cycles
Elongation
72 ℃
30 sec
Final elongation
72 ℃
7 min
5.5. 결과 판정
5.5.1. 전기영동을 통해 타겟 증폭산물의 유무를 확인한다.
5.5.2. 내재유전자 증폭을 통해 정상적인 PCR 반응이 일어났음을 확인한다. 내재유전자가 증폭되지
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APQA_PQ-DP-06(2023)

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