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복한다.
H. parasuis antigen
<
1> ELISA for the detection of
antigen
가 실험방법
H. parasuis
1) Coating buffer
antigen
을 희석하여
100
ELISA plate
에 분주
한 후
4
에서
48
시간 흡착시킨다
2) ELISA plate
30
분간 실온에 정치 한 후
washing buffer
2 3
회 세척한다
3) Blocking buffer
plate
well
100
씩 넣고
8
배 희석된 혈청 접종군 혼합
혈청 대조군 혼합혈청 및 표준품 혼합혈청 을 첫
well
100
넣은 후에
100
2
진 희석한다 단
, column 11, 12
blocking buffer
16
배 희석된 표준양
성혈청과 표준음성혈청을
100
씩 넣는다
4) ELISA plate
를 실온에서
1
washing buffer
3 4
회 세척한다
5) Conjugate(anti-guinea pig IgG, HRP)
blocking buffer
로 희석
(1:1,000)
하여
100
를 모든
well
에 분주하고 실온에서
1
washing buffer
3 4
세척한다.
6) Substrate(ABTS
또는
OPD) 100
를 모든
well
에 분주하고 실온에
20 30
분간
정치시킨 후 모든
well
50
stop solution
으로 반응을 정지시킨 다음 흡광도
(O.D., 405
또는
490
를 측정한다
7)
측정된 흡광도 값을
Rel Pot 3.0 software
로 통계 처리하여
RP(relative potency)
값을 구한다.
나 실험결과의 유효조건
1)
표준음성혈청의 흡광도 값은
이하이어야 하며 표준양성혈청의 흡광도 값과
이상 차이가 나야한다
2)
표준품 혼합혈청과 대조군 혼합혈청과의 흡광도 값의 차는
이상이어야 한다
3) Rel Pot 3.0 software
로 통계 처리시
Slope ratio
이상이어야 한다
다. Buffers
1) Phosphate buffered saline(PBS, pH 7.2 7.4)
NaCl ............................................... 8.0 g
KCl ................................................. 0.2 g
, anhydrous .................... 0.2 g
2
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1-2-02-09

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