총 953페이지

항원배열 방법은 아래와 같다
reference
positive
test
Well
antigen
control
antigen
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
Blank Blank Blank Blank Blank Blank Blank Blank Blank Blank Blank Blank
3.
코팅된
96 well ELISA plate
PBS-Tween 20 (PBST)
으로
3
회 세척한다
4. ELISA plate
transfer plate
에서 만든 항원 희석액을
well
100 ㎕
씩 같은 배열
방법으로 분주한 후
, 96 well ELISA plate
를 밀폐하여 교반기를 사용하여
120
rpm(20 25 )
에서
30
분 동안 배양한 다음
PBST
용액으로
3
5. 96 well ELISA plate
PBST
용액으로 희석한
horseradish peroxidase-conjugated
K 99
특이 단크론 항체를 각
well
100 ㎕
씩 첨가한 다음에 밀폐하여 교반기를 사
용하여
120 rpm(20 25 )
에서
30
분 동안 배양한 후에
PBST
용액으로
3
회 세척한
6.
사용 전
15
분 이내에 만든 기질액
(OPD
또는
ABTS substrate system)
well
100
씩 옮긴 후
, 96 well ELISA plate
를 밀폐하여 교반기를 사용하여
120 rpm(20 2
5 )
에서
10
분 동안 배양한다
7. OPD
기질액을 사용할 경우에는
stop solution(2.5M H
을 각
well
100 ㎕
씩 첨
2
4
가하여 반응을 중지시키고
, ABTS
기질액을 사용할 경우에는
stop solution
첨가 없
ELISA reader (with dual wavelengths 490
test, 650
reference (OPD)
또는
405
test, 490
reference(ABTS))
로 신속하게 흡광도를 측정한다
<
별첨
3>
대장균
987P Pilus
항원 역가시험법
Double antibody sandwich ELISA method
1.
대장균
987P
항원에 특이적인 토끼 다크론 항체
(pab)
는 차가운
0.5M carbonate
coating buffer(pH 9.6)
로 제조회사에서 권장하는 비율대로 희석한 후에
ELISA plate
의 각
well
100
씩 넣고
2 7
～ ℃
에서 하룻밤 동안 둔다
- 166 -
1-2-02-10

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