총 953페이지

항원 배열방법은 아래와 같다
Serum
Duplicate
Duplicate
Duplicate
Duplicate Prod.
Blank
Control
음성항원
양성항원
Stan. Bact
Serial
Well
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
5.
코팅된
ELISA plate
transfer plate
의 희석액을
well
50
씩 같은
pattern
으로
옮긴 후에 희석한 토끼 고도면역 혈청을
column 1
을 제외한 모든
well
50 ㎕
씩 첨
가한다
. column 1
과 에는
2
1% bovine serum albumin
이 함유한
용액
50 ㎕
씩 첨
가한 후에
microtiter plate shaker
에서
60
초 동안 잘 섞은 다음 교반기를 사용하여
100 rpm(37 )
에서
90
분 반응시킨 다음
PBST
용액으로
6
회 세척한다
6.
희석한
HRP-labelled anti-rabbit IgG conjugate(1:300,000)
를 각
well
100 ㎕
씩 첨
가한 후 교반기를 사용하여
100 rpm(37 )
에서
40
분 동안 반응시킨 다음
PBST
용액
으로
6
7.
기질용액
(TMB)
well
100
씩 첨가한 후에 교반기를 사용하여
100 rpm(37 )
15
분 동안 배양한다
8. Stop solution(1.5M phosphoric acid)
을 각
well
100 ㎕
씩 첨가하여 반응을 중지시킨
9. ELISA reader(with dual wave lengths 450
test, 540 630
reference)
로 흡광도
를 읽는다.
<
별첨
5>
대장균
항원 역가시험법
Double antibody sandwich ELISA method for F41 antigen
1.
대장균
항원에 특이적인 토끼 다크론 항체
(Pab)
는 차가운
0.05M carbonate
coating buffer(pH 9.6)
로 제조회사에서 권장하는 비율대로 적절하게 희석한 후에
ELISA plate
의 각
well
100
씩 넣고
～ ℃
에서 하룻밤 동안 둔다
- 169 -
1-2-02-10

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