총 953페이지

2. 96 well ELISA plate
를 실온에서 평형화시킨 다음
PBST(PBS
0.05% Tween 20
함유된 것
) diluent buffer
용액을
열 모든
well
125
씩 가한 후 백신으로부터
추출한
test
항원과
reference
항원
250
에서
열까지 첨가한 다음
열 시
125
씩을
B well
로 옮겨 단계별로 계단 희석하고 맨 마지막
열은
blank
로 사용
한다.
3. 96 well plate
에 항원 희석액
8.2 g,
증류수
94
, pH 9.3)
well
100
2
4
분주한 후
, 96 well ELISA plate
를 밀폐하여 교반기를 사용하여
120 rpm(20 25 )
30
분 동안 배양한 다음
PBST
용액으로
3
회 세척한다
4.
단크론 항체 희석액
(PBS-Tween 20
희석액에
2.0% bovine albumin fraction V
가 함
유된 것 으로 마우스 유래
단크론 항체를 희석하여
well
100
씩 옮긴 후
, 96
well ELISA plate
를 밀폐한 다음 교반기를 사용하여
120 rpm(20 25 )
에서
30
분 동
안 배양한 후에
PBST
용액으로
3
5. Conjugate
희석액
(PBS-Tween 20
용액에
1.0%
정상 토끼 혈청을 함유된 것 에
peroxidase-conjugated goat anti-mouse IgG
를 적절하게 희석한 다음
ELISA plate
모든
well
100
씩 첨가한 후 밀폐하여 교반기를 사용하여
100 120 rpm(20 2
5 )
에서
30
분 배양 후
PBST
용액으로
3
회 세척한다
6.
단크론 항체 희석액
(PBS-Tween 20
희석액에
2.0% bovine albumin fraction V
가 함
유된 것 으로 마우스 유래
987P
단크론 항체를 희석하여
well
100
씩 옮긴 후
, 96
well ELISA plate
를 밀폐한 다음 교반기를 사용하여
120 rpm(20 25 )
에서
30
분 배
양 후
PBST
용액으로
3
회 세척한다
7. Conjugate
희석액
(PBS-Tween 20
용액에
1.0%
정상 토끼 혈청을 함유된 것 으로
peroxidase-conjugated goat anti-mouse IgG
를 적절하게 희석한 다음
ELISA plate
모든
well
100
씩 첨가한 후 밀폐하여 교반기를 사용하여
100 120 rpm(20 2
5 )
에서
30
분 배양 후
PBST
용액으로
3
회 세척한다
8.
사용 전
15
분 이내에 만든 기질액
(ABTS substract substrate system)
well
100
씩 옮긴 후
, 96 well ELISA plate
를 밀폐하여 교반기를 사용하여
120 rpm(20 2
5 )
에서
10
분 동안 배양한다
9. ELISA reader(with dual wavelengths 405
test, 490
reference)
로 신속하게 흡
광도를 측정한다.
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1-2-02-10

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