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별첨
6>
대장균
Type 1 pilus
항원 역가시험법
Competitive indirect ELISA method for type 1 antigen
1.
대장균
type 1
항원을 차가운
0.05M carbonate coating buffer(pH 9.6)
로 제조회사에
서 권장하는 비율대로 적절하게 희석한 후에
ELISA plate
의 각
well
100 ㎕
씩 넣
고 실온에서
30
분 동안
coating
한 후
에서 하룻밤 동안 둔다
2. 96 well ELISA plate
를 실온에서
30
분 동안 평형을 위해 놓아둔 후에
PBST
용액
6.5)
으로
2
3. Blocking buffer(1% bovine serum albumin
이 함유한
PBS) 150
를 모든
well
에 첨
가한 후 교반기를 사용하여
120 rpm(37 )
에서
60
분 동안 배양한 다음
PBST
용액으
2
4. Transfer plate
blocking buffer
100
씩 가한 후
standard pili, reference
항원
백신으로부터 추출한 검사용 항원을 첫 열에
100
가한 다음 단계별로
열에서
열까지
2
항원 배열방법은 아래와 같다
Serum
Duplicate
Duplicate
Duplicate
Duplicate Prod.
Blank
Control
음성항원
양성항원
Stan. Bact
Serial
Well
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
5.
코팅된
ELISA plate
transfer plate
의 희석액을
well
50
씩 같은
pattern
으로
옮긴 후에 희석한 토끼 고도면역 혈청을
column 1
을 제외한 모든
well
50 ㎕
씩 첨
가한다
. column 1
과 에는
2
1% bovine serum albumin
이 함유한
용액
50 ㎕
씩 첨
가한 후에
microplate shaker
에서
60
초 동안 잘 섞은 다음 교반기를 사용하여
100
rpm(37 )
에서
90
분 동안 반응시킨 다음
PBST
용액으로
6
6.
희석한
HRP-labelled anti-rabbit IgG conjugate(1:300,000)
를 각
well
100 ㎕
씩 첨
- 171 -
1-2-02-10

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