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㉯ pH probe, DO probe calibration
각 Probe들을 배양기 Controller에 연결
Calibration → Measure → pH 7.0 → pH 4.01 순서로 calibration 진행
: pH probe : pH 7.0 부터 측정 후 pH 4.01 calibration
pH 7.0 : ±30mV 사이, Slope : 56 mV/pH 이하 정상 범위
>> 기준점 pH 7.0
>> 2 Point Calibration 의 경우 기준점을 중심으로 4.01 또는 9.21 둘 중 하나 선택해 Slope
값이 56mV 이하 나오는지 확인
※ DO probe : 전극 연결 안되어 있는 상태에서 Zero Calibration 잡아주고 멸균 시작
※ 멸균 후 공배양 작업 시 전극 연결하고 Air Flow(Over night) 후에 Air 100%
※ DO probe Zero Calibration : 0 ~10 nA, Slope : 25 ~ 200nA 가 정상범위
DO probe Air 100% Calibration : 100 nA 내외, Slope : 50 ~ 200nA 가 정상범위
㉰ Zero Calibration : Calibration→ DO→ Measure→ Calibration >> 0% >> OK
㉱ Air 100% Calibration : Calibration→ DO→ Measure→ Calibration >> 100% >>
② 2L Bioreactor 공배양
- 2L Bioreactor 멸균 후 잘 말려준 후 배양기 controller의 각 연결 Line과 무균 상태로 연결
● Air Line + Sparger Line
2
● pH meter Line 전극
2
● pO2 Sensor Line 전극
3
● 자켓 In-Out Line : 하단부 In 상단부 Out / Vessel Out Air Cooling Line 연결
표
● Base Line 연결
준
기
- Product line을 통하여 배양기 내부에 배지 투입 (1/8 Size tube Pump Set speed 170)
술
- 배지 700ml 투입 후 Product line Sealing
편
람
- 외부 환경에 노출 되는 부분이 있는지 확인 후 배양 조건이 유지되는지 확인
● Air : 60ccm
● pH 7.23 설정
● pO2 Sensor Zero Cal 잡은 후 Air Purge 후(Over night) 100% Cal 설정
● Temp. 37℃ (단계적으로 상승 Ex : 24 ℃ > 27 ℃ > 30 ℃ > 34 ℃ > 37 ℃)
- 정상적으로 작동되는지 확인 후 24h 공배양 시작
③ 2L Bioreactor에서 BHK-21 부유세포 배양 및 구제역 바이러스 접종
- 2L Bioreactor 공배양 24h 경과 후 오염이 발생하지 않으면 BHK-21 부유세포 Seeding 시작
- 배양기 상부의 Product line으로 BHK-21 부유세포를 3×10
5
/ml로 Seeding
- Seeding 완료 후 Welder를 이용해 배지 Bottle과 연결한다.
- 배지를 소량 투입해 Line에 남아있는 잔여 Cell 까지 모두 배양기 내부로 투입
- Bio Sealer를 이용해 Line Sealing 후 BHK-21 부유세포 배양 시작
- 이 때 Sampling Line을 통해 Sampling 후 초기 조건(pH, Cell 수 등등) 기록
- 3.5일간 배양 후 신선한 Cellvento 배지를 30% 추가한다.
- 4-Way line / Virus inoculation line으로 Virus + Medium 후 Welder로 연결해 Virus 투입
- Cellvento Medium으로 line의 잔여 Virus 배양기 내부로 밀어주고 line Sealing
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