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표 1. 광견병 Real-time RT-PCR용 primer 및 probe
Primer
Nucleotide
Length
Name
Sequence (5' to 3')
& Probe
location
(bps)
Forward
N5F
GRAATTGGGCTTTGACTGGA
353
187
Reverse
N5R
AAAGGGGCTGTCTCGAAAAT
533
Probe
N5pb
FAM-TATAGGCTGAGCAAAATATCGGGG-TAMRA
441
2) Real-time RT-PCR의 검출한계 및 특이도 확인
가. 선발된 primer를 이용하여 광견병바이러스 cRNA를 합성하고, 그 농도를 기준으로 copy
수를 계산한 후 희석 RNA로 검출한계를 조사한 결과 100 copy수까지의 검출감도를 보임
나. 시험법에 대한 특이도를 확인하기 위하여 개디스템퍼바이러스등 23종의 다른 바이러스에
대한 비특이반응 유무를 확인한 결과 전부 음성으로 확인됨
40
35
y =-3.3826x +40.714
2
R
=0.9989
30
Ctvalue
25
20
15
10
5
2
4
6
8
10
Copy No. (Log)
그림 1) 광견병바이러스에 대한 Real-time RT-PCR의 검출한계
3) 야외 시료를 이용한 Real-time RT-PCR의 진단 효율성 확인
가. 너구리, 개, 소, 고양이 뇌조직 시료(488점)에 대한 Real-time RT-PCR과 FAT 검사
결과를 비교한 결과, 444개 음성시료에 대한 비특이반응은 관찰되지 않았으며, FAT에서
양성인 시료(42개) 모두 Real-time RT-PCR에서 양성 반응을 보였고, FAT 음성인 너구리
시료 2개에서 Real-time RT-PCR 양성반응을 확인하였으며, 이것은 FAT에 사용된
시료가 신선하지 않은 이유에 따른 결과로 추측됨
나. 양성시료에 대한 Ct값을 확인한 결과 대부분의 시료에서 10~20 cycle에서 증폭 신호가
관찰됨에따라이시험법의검출감도로충분히야외감염축을검색할수있을것으로판단됨
표 2. 야외 뇌조직 시료를 이용한 Real-time RT-PCR과 FAT 시험 결과 비교
시료수
FAT 양성
Real-time RT-PCR 양성
너구리
33
15
17
개
121
11
11
소
329
16
16
고양이
5
합계
488
42
44
- 234 -

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