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구제역Asia1형Shamir백신후보주를이용한LPB-ELISA실험법
표준기술 개발개요
표준기술 개발목적
- 혈청 시료에서 구제역 Asia1형 Shamir주 바이러스에 대한 항체 수준을 신속하게 스크리닝하여
Asia1형 Shamir주 백신 접종 사후 모니터링(post-vaccination sero-monitoring) 및 백신의 유효
성 평가에 활용하기 위함
표준기술 활용사항
- LPB-ELISA 시험법은 WOAH 매뉴얼에서 권장하고 있는 축종의 면역학적 방어수준을 결정하는
혈청학적검사기법으로공격접종시험법및중화항체역가시험법의적용한계를대체하여백신의
효능평가와 백신주의 적합성을 스크리닝하기 위해 사용할 수 있는 검사 방법임
- 향후 중화항체검사법(VNT)과 병행하여 백신 매칭 및 효능평가에 활용 가능
구분
LPB-ELISA
VNT
백
·많은 양의 시료 동시 검사 가능
신
·실제방어효력이있는항체반영
장점
·비교적 짧은 시간에 검사 가능
평
·적은 양의 혈청 및 항원으로 실험 가능
·일반 실험실에서 시험검사 가능
가
·실험에 장기간 소요
분
야
·실험자의 경험에 따라 중화항체 역가 측정값의
단점
·불활화 후 분리 정제된 고농도 항원 필요
변동이 큼
·생물안전 3등급 이상의 차폐시설 필요
기대효과
- 야외발생 및 백신 접종 시 혈청학적 수준을 측정하여 군집면역과 백신 효능평가 등에 일반실험실
에서 적용할 수 있는 신속한 혈청 평가기법으로 활용 가능할 것으로 기대됨
표준기술 개발내용
Asia1형 shamir주 LPB-ELISA 기법을 위한 단클론 항체 및 VHH(nanobody)제작
- Asia1형 shamir 백신주의 정제된 항원을 마우스에 면역하여 획득한 면역세포를 세포융합(fusion)
을 통해 hybridoma를 생산하고, 항원에 특이적인 hybridoma를 선별을 통해 단클론 항체(1F9)를
제작하여 capture antibody로 활용(그림1.A)
- Asia1형바이러스인1/Jiangsu/China/2005strain에대한VHlibrary를토대로밝혀진CDR1,2,3se-
quence를이용하여재조합VHH4종을제작함.Asia1/Shamir항원(146S)을이용한Indirect-ELISA에서
Asia1항원과의반응성이좋은C20-HRPVHH를HRP-conjugateddetectorantibody로활용(그림1.B)
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