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과제분류
국제공동과제
표
과제코드
표준기술활용
I-AD16-2011-11-01
준
National Guideline(NG)
기술코드
AD003-11-22
기
제안부서 구제역진단과 바이러스진단연구실
술
1. 과 제 명
2010년 국내발생 구제역바이러스의 병원성 및 분자역학적 분석 연구
활
2. 제
목
구제역 혈청형(유전형) 진단을 위한 dualplex rRT-PCR법
용
3. 연 구 원
성 명
직 급
과(부서)
연 구 실(팀)
참여율(%)
a. 주담당자
이광녕
수의연구사
구제역진단과
바이러스진단연구실
40
b. 담 당 자
김수미
수의연구사
구제역진단과
바이러스진단연구실
20
탁동섭
수의연구관
구제역진단과
바이러스진단연구실
10
박종현
수의연구관
구제역진단과
바이러스진단연구실
10
고영준
수의연구사
구제역진단과
혈청예찰연구실
5
이향심
수의연구사
구제역진단과
혈청예찰연구실
5
신연경
수의연구관
구제역진단과
혈청예찰연구실
5
김병한
수의연구관
구제역진단과
과 장
5
4. 표준기술 활용사항
? 동물질병 표준진단법에 등재하여 구제역 O형(동남아형) 또는 A형(동남아형) 동시 감별진단에
활용. 혈청형 O/A에 각각 특이적인 프라이머/프로브 세트를 작성하여 실시간 RT-PCR을
수행하도록 함. 이 프로브는 Taqman probe 형태로 설계되어 있음.
5. 표준기술 내용요약
? 두 종류의 프라이머/프로브 셋트를 적정 농도로 희석하여 검체와 혼합함.
? 장비에서 두 종류의 probe에 표지한 상이한 reporter fluorescent dye에서의 형광값을 읽도록
detection channel을 선택함.
? 역전사 반응(Reverse transcription)반응을 통해 cDNA합성
? PCR반응을 진행하고 각 PCR cycle의 extention 단계 종점에서 detection channel을 열어서
각 reporter fluorescent dye 특이적으로 emission하는 신호를 읽어들임.
? 모든 반응이 끝난후 각 fuorecent dye별 amplifiation plot상에 나타난 결과를 분석하여
각 시료별로 threshhold cycle(Ct값)을 구하여 양/음성을 판정함.
※ 구제역에 특이적인 증폭반응이 있을 경우 실시간으로 그 증폭양상을 확인할 수 있으므로
그 결과에 따라서 즉각적인 대응 및 후속 진단 절차에 들어갈 수 있음.
6. 색인용어 구제역, rRT-PCR, taqman, probe, 실시간, PCR
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