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⑧ Autoclave tape를 붙힌 후 겉면에 수의유전자원번호를 적는다.
연
⑨ Autoclave(121℃, 15min) 한 후 건조기에서 건조시킨다.
구
(2) 동결건조용 Skim milk 준비
성
① 300㎖ 삼각 플라스크에 skim milk powder 10g을 넣고 D.W.를 부어 100㎖을 맞춘다.
과
② skim milk를 잘 풀어준 후 autoclave 돌려준다.(121℃, 5min)
활
③ Clean bench에서 일회용 5㎖ tube에 autoclave 돌려준 skim milk(10%)을 2㎖ 씩 분주
용
하고 호일에 감싼 후 다시 autoclave 돌려준다.(121℃, 5min)
집
④ 4℃에 보관하여 사용한다.(2-3주 사용)
(3) 동결건조용 앰플 제작과정
① 기탁된 수의유전자원에 고유 바코드번호를 부여한다.( 예 : 021200001 )
② Skim milk tube 겉면에 ① 의 바코드 넘버를 적는다.
③ ① 의 균을 백금이로 긁어 같은 바코드 넘버의 skim milk tube에 넣고 vortex하여 풀어
준다.
④ Skim milk tube에 적힌 번호와 동일한 멸균된 앰플, 3㎖ 주사기, 9cm 주사바늘, rack,
핀셋을 준비한다.
⑤ 알코올솜으로 clean bench 바닥을 깨끗이 닦고 핀셋을 화염멸균해 놓는다.
⑥ 동일 바코드넘버의 앰플 솜을 핀셋을 이용해 하나씩 빼고, 솜을 뺀 앰플의 입구를 불에
살짝 화염멸균 해주고 rack에 꽂는다.
⑦ 앰플에 주사기를 이용해서 skim milk tube에 푼 균을 200㎖ 정도씩 균일하게 분주한다.
⑧ 분주된 앰플을 rack에서 꺼내어 살짝 화염멸균하고 ⑥에서 뺐던 솜으로 다시 입구를
막아준 다음 rack에 다시 잘 꽂는다.
⑨ 모든 균의 분주가 끝나면 균을 꽂은 rack을 -70℃ 냉동고에서 2시간 이상 얼린다.
(4) 동결건조 토치하기
① 동결건조기 전원을 올리기전 드레인에 마개를 꽂는다.
② 동결건조기 전원을 킨 후 RUN/STOP 버튼을 눌러 -50℃까지 온도가 내려가길 기다린다.
(20-30분)
③ 얼려 놓은 앰플을 동결건조기에 올려놓고 vac pump 버튼을 눌러 진공시킨다.(기압10
이하)
④ 앰플이 완전히 건조(보통 반나절 이상이 걸린다)되면 vac pump 버튼을 꾹 눌러 진공을
풀어준다.
⑤ 앰플을 빼서 가지에 끼우고 다시 vac pump 버튼을 꾹 눌러 진공시킨다.
⑥ 밸브를 열고 gauge가 11까지 내려가면 작업한다.
⑦ 작업이 끝나면 밸브를 잠그고 stop 버튼을 누른다.
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