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2020년 소결핵병 검사법 교육
결핵 육아종 시료 PCR진단을 위한 전처리과정(검역본부)
DNA 추출 :
? 공통 :
? DNA 추출킷트 내 lysis버퍼 적용. 단, 조직이 충분히 lysis되지 않은 경우, 시간을 연장하여 처리(가급적 킷트
내 lysis버퍼와 Proteinase K를 같이 사용하는 킷트 권장(병용 또는 순차적 처리)
? Universal타입의 킷트보다는 조직에 특화된 킷트 사용시 민감도 향상(킷트 간 추출효율 차이있음)
? Column방식 : lysis버퍼 처리 후, 유제액을 column위에 분주한 다음, lysis되지 않은 덩어리 또는 겔 형태의 잔여조
직은 제거하고, 원심분리 후 잔여 유제액이 column위에 남은 경우, 추가로 원심분리하여 최대한 내릴 것
? Magnetic bead방식 : 킷트 내 Lysis버퍼 처리 후, 원심분리한 상등액 이용 권장. 마그네틱 비드에 점성이 높은 상태
의 시료가 결합하면 추출과정 중 DNA 외에 불순물이 계속 따라붙어 수율이 나빠짐. 최종 Elution 된 DNA에 마그네
틱 비드가 남은 경우, 가급적 원심분리를 통해 제거하는 것을 권장
PCR :
조직 유래 다양한 inhibitor의 존재 또는 고농도 DNA에 의한 위음성 발생 가능
? DNA원액과 1/10희석액으로 실험 병행
A-Column(환경, 조직시료 전용)
90%
B-Magnetic bead(조직 전용)
(27/30)
100%
50.0%
C-Magnetic bead(바이러스 전용)
(30/30)
(15/30)
D-Column(Pathogen, universal)
63.3%
86.7%
E-Column(Genomic DNA, Universal)
(19/30)
(26/30)
* B, C는 동일한 자동화 추출장비이며 킷트만 다름
가급적 조직에 보다 적합한 추출킷트 사용(킷트
A
B
C
D
E
별로 Lysis버퍼의 해리력, inhibitor 억제 여
부, bead 종류 등 차이있음)
1. 소결핵병 발생농장 동거축에 대한 항체ELISA적용 실험(`20-22)
* 감염 후기~말기 개체 진단에 활용가능하므로, 재발빈도가 많은 발생농장
의 경우, 기존 PPD, IFN-r 음성소에서의 추가진단에 활용가능
->반복발생농장의 감마인터페론 및 PPD음성소 혈장(감마인터페론실험 완료)필요
2. 소결핵병 PPD진단법 표준화(`21-22)
* 연속주사기 또는 무침주사기의 적용을 통한 접종방법 개선 접종 후 결과
판정 표준화 등
* 요네병 항체모니터링(`21-25) : 브루셀라 일제검사 완료된 잔여혈청 활용
C46E

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