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돼지말초혈액단헥세포에서사이토카인mRNA측정을위한검사법설정
표준기술 개발개요
표준기술 개발목적
- 돼지에서의 면역반응 평가를 위해 여러 cytokine mRNA 농도를 측정하기 위한 말초혈액단핵
세포 (peripheral blood mononuclear cell, PBMC)의 분리 및 재감작, 그리고 RNA분리와 설정
된 primer와 probe를 이용한 중합연쇄효소반응(quantitative reverse transcription-polymerase
chainreaction,qRT-PCR)기법을통한발현량측정법을구축함으로써기존구제역백신의혈청
학적 평가와 더불어 세포성 면역반응에 의한 구제역 백신 평가법으로 활용될 것으로 기대됨
표준기술 활용사항
- 백신의 효능평가와 관련된 세포성 면역반응에 관한 연구에 활용함으로써 공격접종, 항체검사 등
과 같은 구제역 백신 효능평가 연구법으로써 활용하고자 함
- 세포성 면역반응을 ELISA 등의 항원항체반응으로 검사하기에는 일반 돼지에서는 다양한 면역 자
극들에대한노출로인해적합하지않고,상용화된진단키트의다양성도부족하여핵산추출을통
백
신
한 검사법을 그 대안으로 활용하고자 함
평
가
기대효과
- 기존 구제역 백신의 효능 평가는 충분한 면역유도를 위해 최소 21일의 기간이 요구되나, 본 검사
분
야
법은 세포성 면역반응이 일주일 내 유도되므로 비교적 빠른 시간 내 검사할 수 있으며, 다양한 면
역전달 물질에 대해서도 검사 가능함
표준기술 개발내용
돼지 면역세포인 PBMC에서 면역자극을 이용한 면역반응 측정 검사법 설정
- 문헌 조사를 통해 확보한 PBMC 분리 및 면역자극 방법을 구체화하는 과정에서 지속해서 개선하
여세포의활성의지표를사용되는GAPDHCt값이처음에반응시간에따라상승하는문제를해결
- 면역자극된 PBMC에서 RNA추출 및 cDNA 합성을 방법을 설정하고 문헌조사를 통해 확보된
cytokine PCR을 위한 PCR primer와 probe가 정상적으로 반응됨을 확인하였음
그림 1. 분리된 PBMC를 면역자극 물질인 poke weed mitogen(PMW)로 감작후 측정된 cytokine mRNA 수준
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돼지말초혈액단헥세포에서사이토카인mRNA측정을위한검사법설정
표준기술 개발개요
표준기술 개발목적
- 돼지에서의 면역반응 평가를 위해 여러 cytokine mRNA 농도를 측정하기 위한 말초혈액단핵
세포 (peripheral blood mononuclear cell, PBMC)의 분리 및 재감작, 그리고 RNA분리와 설정
된 primer와 probe를 이용한 중합연쇄효소반응(quantitative reverse transcription-polymerase
chainreaction,qRT-PCR)기법을통한발현량측정법을구축함으로써기존구제역백신의혈청
학적 평가와 더불어 세포성 면역반응에 의한 구제역 백신 평가법으로 활용될 것으로 기대됨
표준기술 활용사항
- 백신의 효능평가와 관련된 세포성 면역반응에 관한 연구에 활용함으로써 공격접종, 항체검사 등
과 같은 구제역 백신 효능평가 연구법으로써 활용하고자 함
- 세포성 면역반응을 ELISA 등의 항원항체반응으로 검사하기에는 일반 돼지에서는 다양한 면역 자
극들에대한노출로인해적합하지않고,상용화된진단키트의다양성도부족하여핵산추출을통
백
신
한 검사법을 그 대안으로 활용하고자 함
평
가
기대효과
- 기존 구제역 백신의 효능 평가는 충분한 면역유도를 위해 최소 21일의 기간이 요구되나, 본 검사
분
야
법은 세포성 면역반응이 일주일 내 유도되므로 비교적 빠른 시간 내 검사할 수 있으며, 다양한 면
역전달 물질에 대해서도 검사 가능함
표준기술 개발내용
돼지 면역세포인 PBMC에서 면역자극을 이용한 면역반응 측정 검사법 설정
- 문헌 조사를 통해 확보한 PBMC 분리 및 면역자극 방법을 구체화하는 과정에서 지속해서 개선하
여세포의활성의지표를사용되는GAPDHCt값이처음에반응시간에따라상승하는문제를해결
- 면역자극된 PBMC에서 RNA추출 및 cDNA 합성을 방법을 설정하고 문헌조사를 통해 확보된
cytokine PCR을 위한 PCR primer와 probe가 정상적으로 반응됨을 확인하였음
그림 1. 분리된 PBMC를 면역자극 물질인 poke weed mitogen(PMW)로 감작후 측정된 cytokine mRNA 수준
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