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나. 제2세부과제명: Reverse genetics system을 이용한 병원성에 관한 연구
성과활용
구 분
연구개발목표
연구개발 내용 및 범위
연구기간
계 획
1)분리주간의 병원성의 차이
? 조류인플루엔자의
및 변이를 유전자 수준에서
병원성 연구에 활용
‘08.1
1차년도
검색
가능한 reverse
~
학술발표
(2008년)
2)reverse genetics system
genetics
‘08.12
을 이용한 병원성 검증 및 조
system의 구축.
절 시스템 구축
Ⅲ. 연구방법 및 수행전략
1. 재 료
가. 세포주 : MDCK cells, 293T cells(ATCC)
나. 동물: SPF chicken, SPF embryonated eggs
다. 동물세포배양: MEM media, FBS, Trypsin-EDTA(Invitrogen)
라. Competent cells: TOPO 10 (Invitrogen)
마. Transfection reagents: Lipofectamine LTX, Trypsin(Invitrogen)
바. Enzymes: T4 DNA ligase, restriction enzyme (BsmBI, SapI, BglII)(NEB)
사. Cloning materials: RNeasy minikit, miniprep kit, midiprep kit, PCR
purification kit(Qiagen)
아. PCRmaterials: Omniscript RT(Qiagen), Platinumtaqpolymerase(Invitrogen)
자. Plasmid vector: pHW2000
2. 연구전략 및 방법
가.제1세부과제명:Reversegeneticssystem을이용한고증식성바이러스제작기술
개발
1) 1차년도: Plasmid based reverse genetics system 구축
가) Human polI promoter and terminator derived plasmid vector (pHW2000)
확보
나) 국내 분리주로부터 얻어진 cDNA를 cloning 하기 위한 vector modification
다) 바이러스 rescue를 위한 동물세포(293T, MDCK 세포) 배양 시스템 구축
라) 효율이 높고 독성이 낮은 transfection material 검색
마) Transfection condition 최적화 작업
바) 8 plasmid total transfection을 통한 influenza virus rescue system 확립
2) 2차년도: Reverse genetics system을 이용한 재조합 바이러스 제작
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