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※ 곧바로 사용을 안 하면 1 ㎕ RNase inhibitor을 넣고 -20℃에 보관한다.
DNA제작
① GoScript™ Reverse Transcription mix를 얼음 위에서 녹인후 아래 표와 같이 차례로 넣은
후 피펫으로 부드럽게 섞는다.
표 1. Reverse Transcription 반응액 혼합
Component
Volume
Nuclease-Free Water
4㎕
GoScript™ Reaction Buffer, Random Primer
4㎕
GoScript™ Enzyme Mix
2㎕
Final Volume
10㎕
② 전체 혼합액을 진탕기나 피펫으로 부드럽게 섞는다.
③ 선택사항 : 60% 이상의 GC를 함유하여 이차 구조가 높은 수준으로 있는 RNA의 경우 70℃
에서 5분간 반응후 최소 5분간 얼음에 넣어 식힌다. 소형 원심기를 이용하여 5분간 원심을
백
돌려서 혼합액을 튜브 밑바닥에 모은다.
신
④ GoScript™ReverseTranscriptionmix를 최대10㎕의RNA시료를아래표와같이각tube
평
또는 well에 넣는다.
가
표 2. Reverse Transcription 반응 혼합액과 RNA 반응 방법
분
야
Component
Volume
GoScript™ Reverse Transcription Mix
10㎕
Experimental or Reference RNA
__㎕
Nuclease-Free Water
to a final volume of 20㎕
Final Volume
20㎕
⑤ 온도 반응은 다음과 같다.
표 3. Reverse Transcription 반응 온도와 시간 조건
Process
Temperature
Time
Anneal
25℃
5 min
Extension
42℃*
1 hour
* 37~55 ℃ for optimization
51

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