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5. 연구영역별 연구보고서 / 가. 국가재난형질병대응연구
불활화구제역바이러스 입자중 면역원성이가장 우수한 것으로 알려진 온전한 형태의 구제역바이러스
입자인 146S만을 선택적으로 측정하여 구제역 백신내바이러스 함량을 측정함에 있어서 기존의 밀도구배
초고속원심분리법평가기법을대체할수있는편리한기법개발을모색하고자하였다. 이를위하여자체
제작한 단클론항체를 적용하여 수크로즈 밀도구매 초고속원심분리 분획에 대한 반응 양상을 흡광도
그래프와 비교평가하였다(Fig. 15).
(가)
(나)
(가)
(나)
Fig. 15. O형(안동주) 불활화 구제역바이러스의 수크로즈 밀도구배 초고속원심분리 분획에 대한
SDS-PAGE(가), 자체제작 단클론항체 ELISA(나), 기존 키트 단클론항체 ELISA(다), 항원간이키트
단클론항체 ELISA(라) 적용하여 측정한 불활화 구제역바이러스 입자별 검출능 비교
259 nm에서의 흡광도에서는 5번째 분획에서peak를 보인 반면에 70-17 단클론항체(O형, A형, Asia1형,
C형 공통 항체)를 이용한 ELISA법에서는 8번 분획에서peak를 보였다. 8번 분획은75S에 해당하며 핵산
RNA가 제거된 empty capsid에 해당한다. SDS-PAGE에서의 8번 lane 결과와도 일치하는데empty capsid
에서는 VP2와 VP4가 절단되지 않은 형태인VP0 형태로 나타난다. 10번 분획에서의 작은peak는 12S의
pentamer에 해당한다. 결과적으로 70-17 항체는 146S가 아닌 75S나 12S와 같이 degraded form에 대한
affinity가 큰 것으로 판단된다.
반면에 76.5E 자체개발 항체와 Prionics type O ELISA에 포함된 단클론항체는 유사한 반응양상을
나타내었으며 SDS-PAGE 결과 양상과 일치된 결과를 보여주었다.
향후에는 구제역 O형, A형, Asia1형의 146S에만 선택적으로 결합하는 단클론항체를 제작하여 구제역
백신 함량의 표준이 되는 146S 측정용 ELISA법을 확립할 계획이다.
www.qia.go.kr 161

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