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2-2-2-01
동결보존된
hybridoma
를 제조용 배지에 부유한 후
37
배양기에서
2
3
4
. hybridoma
가 증식되는 것이 현미경으로 확인되면
3 4
간격으로 제조용 배지를 이용하여
1 : 3
비율로 계대배양한다
3.3.2.
본배양
1
hybridoma
는 돼지콜레라 바이러스의 항체를 함유한 마
4
우스의 복수
(Ascite)
를 생산하기 위하여
1
hybridoma
1×10
개 되게 농도를 조절하여 본배양 배지에 접종하고
37
에서
4 5
일간
배양한
다 배양 후 오염여부 세포의 활성상태를 현미경으로 관찰한다
3.2.3.
단클론성 항체생산을 위한 마우스 복수 생산
돼지 콜레라 바이러스의 항체를 함유한 마우스의 복수를 생산하기 위해
10 15g
의 건강한
Balb/c
마우스에
5 10
두를 선정하여 마리 당
0.5ml
씩의
ristane
을 복강 내에 접종하고
10 30
일 후에 본 배양에서 증식된
hybridoma
를 800rpm
에서
10
분간 원심하여 수확한 것을 무혈청 배지로
1
무혈청
6
배지로 세포수가1×10
개의 농도로 희석하여 각
Balb/c
마우스 당
1ml
접종한다. 채취한 복수는 고속원심기로
6,000rpm
30
분간 원심하여 상층액
을 수확한다. 수확한 원액 항체가
1,000
배 이상 의 일부는 원액검사에 사용하
고 나머지는
-70
이하의 냉장고에 보존한다
3.2.4.
항체 농도조절
항체는 원액검사의 항체가 측정시험결과에 의하여 항체가가
4
배 이상 되도록
조절한다.
3.3.
원액검사
3.3.1.
무균시험
동물용 생물학적제제 일반 시험법
-5
에 의한 검사에 따른다
3.3.2.
항체가 측정시험
3.3.2.1.
재료 및 시험
검사품 수확한 항체복수 을
PBS(
부기 를 이용하여
2)
10
배 단계 희석하여
돼지콜레라 바이러스를 증식한 후 아세톤으로 고정된 돼지 신장세포표본
anti-mouse FITC conjugate
를 반응한 후 형광현미경으로 관찰한다
3.3.2.2.
판정
역가는 특이형광이 인정되는 최종 희석배수의 역수를 환산하여
4

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