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[ 붙임 ] 1. 동물질병표준검사법 : 스크래피(Scrapie)
연
구
성
1
신속검사(항원ELISA)
과
활
1. TeSeE BSE(Bio-rad) 진단킷트
용
집
(1) 개 요
○ 의심 시료내 변형 프리온을 검출하는 방법으로 냉동(냉장)조직시료로부터 proteinase를
처리하여 정상 프리온을 제거한 후 sandwich ELISA방법으로 검출하는 방법
- BSE 진단킷트(TeSeE BSE, Bio-rad)는 TeSeE 정제 킷트, TeSeE 검출 킷트, 샘플채취
주사기, 정량주사기, 시료채취용 숟가락 및 채취통으로 구성되어있음
(2) 시약 및 기구
1) PrP 정제(TeSeE정제킷트 : 2~8℃에서 보관시 유효기간까지 보존가능)
① proteinase K 용액 제조
처리검체 수에 따라(아래표 참조) TeSeE 정제킷트의 용해액(Reagent A)으로
proteinase K를 250배로 희석한다(희석한 proteinase K용액은 실온(18~30℃)에서 6
시간 보존가능하다).
Reagent A
proteinase K
Reagent A
proteinase K
검체수
검체수
용량
용량
용량
용량
2
1㎖
4㎕
50
13㎖
52㎕
10
3㎖
12㎕
58
15㎖
60㎕
18
5㎖
20㎕
66
17㎖
68㎕
26
7㎖
28㎕
74
19㎖
76㎕
34
9㎖
36㎕
82
21㎖
84㎕
42
11㎖
44㎕
90
23㎖
92㎕
2) PrP 검출(TeSeE검출킷트 : 2~8℃에서 보관시 유효기간까지 보존가능)
① 사용하는 시약, 상품화된 마이크로플레이트는 사용하기 약30분전에 냉장고에서 꺼내어
실온에 방치해 둔다.
② 세척원액(R2)을 삼차증류수에서 10배 희석, 혼합하여 희석세척액(R2')으로 한다.(2~8℃에서
2주간 보존가능하다.) : R2'(1000㎖)=R2(100㎖)+삼차증류수(900㎖)
③ 양성 컨트롤(R4)의 병을 가볍게 더빙한 후 개봉하고, R6를 4㎖ 첨가한다. 1분간 방치
한 후, 부드럽게 혼합하여 용해한다.(실온에서 2시간, 2~8℃에서 4시간, -20℃에서 6개
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