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2-2-2-02
건강한
4
5
일령의
포유마우스에
일본뇌염
바이러스
Nakayama
주를
0.03ml
뇌 내에 접종한다 접종 후
2
일 이내에 폐사한 마우스는 항원생
산에 사용하지 않는다.
3.2.2.
바이러스감염 마우스 수확
Nakayama
바이러스를 접종 후
4 7
일 사이에 신경증상을 나타내는 마우스
-70
에 보존한다
(-20
보관시 바이러스항원이 자가융해됨
3.2.3.
항원수집
1)
수확된 마우스의 뇌를 유발에 적출하여
8.5% Sucrose
를 이용하여
20%
의 뇌 유제액을 만든다
즉 마우스 뇌의 무게가
20g
이면
8.5%
sucrose 80ml
를 넣는다
2)
이 유제액을
2,500rpm
에서
10
분간 원심한다 상층액을
18
게이지 바늘이
부착된 주사기를 이용하여 상층액을 흡입한 후 유제액의
20
배량의 냉아
세톤
(-20
에 분출한다
3)
유제액을 혼합하면서 아세톤을 철저하게 흔든다
4) 이때 혼탁된 아세톤을 버리고 새로운 냉 아세톤을
20
배 량을 더하여 다시
혼합한다.
5)
그 후
4
에서
1
시간 동안 정치시킨 후 조심스럽게 아세톤을 버린다
6)
남아있는 아세톤은 진공펌프를 이용하여 제거하고 건조시킨다
7) 완전히 건조되면 처음 뇌 유제액의
2
normal saline
으로 건조괴를
녹인다.
8) 4
에서
magnetic bar
를 이용하여 제조된 항원을 완전히 하룻밤동안
(overnight)
용해한다
9)
용해된 액을
10,000 rpm
에서
30
분간 원심분리한 후 상층액을 취한다
10) 이 상층액을 일본뇌염 혈구응집용 항원
(8,000 HA unit
이상 의 원액으로
하며 일부는 원액검사로 사용하고 나머지는
-20
이하의 냉장고에 보존한다
3.2.4.
항원농도조절
항원은 원액검사의 역가시험 결과에 의하여
512 HA unit
이상이 되도록 항
원농도를 조절한다.
3.3.
원액검사
3.3.1.
순수시험

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