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개월간 보존가능하다. 500㎕씩 분주하여 -20℃에 보관하는 것이 좋으며 3회 이상
해동을 반복하지 말라.)
연
구
④ 효소표지항체원액(conjugate, R7)을 희석세척액(R2')으로 10배 희석하고 부드럽게 혼화
성
하여 효소표지항체희석액(R7')로 한다. : R7'(1㎖) = R7(0.1㎖) + R2'(0.9㎖)
과
1줄의 스트립(8공)에 대하여 1㎖의 효소표지항체희석액(R7')이 필요하다 (실온에서 8
활
시간 보존가능하다).
용
⑤ 호일 등으로 차광한 용기에 기질완충액(R8)과 발색액(R9)을 10 : 1의 비율로 혼합하여
집
희석기질발색액(R8 + R9)로 한다. : R8 + R9(1.1㎖) = R9(0.1㎖) + R8(1㎖)
1줄의 스트립에 대하여 1㎖의 희석기질발색액(R8 + R9)이 필요하게 된다(실온에서
6시간 보존가능하다. 단, 사용시에 푸르게 발색되어 있는 경우는 사용할 수 없으므로
새로 만든다)
(3) 시험방법
* 아래의 검사방법은 제조회사 권장방법(manual)에 따른 검사방법임
1) PrP 정제(TeSeE정제킷트)
① 소 뇌간(brainstem)의 Obex부위를 350±40mg을 계량하여 취한다.
② 계량하여 취한 검체를 kit내 샘플튜브에 넣는다.
③ 샘플튜브를 ribolyser 또는 TeSeE precess 48에 장착하여 완전히 균질화(homogenise)
한다.
Ribolyser
TeSeE Precess 48
Time(sec)
45
-
Speed
6.5
-
Program
-
Program 1
균질화가 불충분 할때 1또는 2회 더 하며 각 회수 사이에 시료 tube를 실온에 두었다가
실행
④ 균질화된 샘플에서 고형물을 함유하지 않도록 주의하면서 250㎕량을 취해, 2㎖ 에
펜도르프튜브 등에 옮긴다.(이 시점에 샘플은 실온에서 8시간, 2∼8℃에서 15시간,
-20℃에서 1년 보존가능하다. -20℃에 보관되었던 시료는 반드시 실온에서 해동하며,
냉동/해동 횟수를 3회 이상 하지 말아야한다. 옮기기 전에 시료는 항상 위아래로
천천히 흔들어 균질화시켜야 한다)
⑤ 샘플수에 따라 제조한 proteinase K 용액을 250㎕ 첨가하여, 잘 혼합한다(튜브 뚜껑을
닫고 위아래로 흔들어 10회 정도 섞음).
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