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2-2-2-12
세포증식용 배지 부기 를 사용한다
1)
3.2.
원액제조
3.2.1.
잡종세포배양
세포증식용 배지에 돼지전염성위장염 바이러스 특이항체 생산 hybridoma
37
주를
3 5
일간 배양한다
3.2.2.
잡종세포수확
Hybridoma 37
번주의 증식을 확인 한 후 상층액을 수확하여
수확한 원액의
일부는 원액검사에 사용하고 나머지는
-20
에 보존한다
3.2.3.
항체농도조절
항체는 원액검사의 항체가 측정시험결과에 의하여 배 이상 되도록 조절한다
8
3.3.
원액검사
3.3.1.
무균시험
동물용 생물학적제제 일반 시험법
-5
에 의한 검사에 따른다
3.3.2.
항체가측정 시험
3.3.2.1.
재료 및 시험
세포
-MEM, PBS(
부기
3), slide glass, acetone, anti-mouse IgG
-FITC conjugate, mounting buffer(
부기 를 사용한다 돼지 호흡기코로
4)
나 바이러스와 돼지 전염성위장염 바이러스를
세포에 감염시킨 후
50%
가 일어났을 때
, 80% acetone (-20 )
으로
10
분간 고 정한
후 건조시킨다 생산된 항체를
2
100㎕
분주한 후
30
분간 반응시킨다 이 후
PBS(
부기 로
3)
3
2
차 항
체인
anti-mouse IgG FITC conjugate
100
분주후
30
분간 반응시
킨 다음
PBS(
부기 로
3)
3
회 세척한다
. Mounting buffer
cover slide
덮고 형광 현미경으로 관찰한다.
3.3.2.2.
판정
돼지 전염성위장염 바이러스에 감염된 세포의 세포질에 특이 형광이 나타
나야 하며 돼지 호흡기코로나 바이러스에 감염된 세포의 세포질에서는
형광이 관찰되어서는 아니된다
대조세포에서는 형광이 인정되어서는
아니된다.
3.3.3.
특이성 시험

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