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4. 식물검역기술개발연구
라. 박테리오파아지 : 바실러스 섭틸리스에 기생하는 파이29 파아지
마. 중합효소 유전자 : 파아지로부터 직접 분리 또는 분양
바. 프로브 및 칩 : 커스텀 제작으로 필요에 따라 맞춤형 칩을 사용
2. 연구전략 및 방법
가. 단일 개체 또는 단일 세포 분리기술의 확립 (2013년, 1년차)
1) 화학적 키모텍시스 이용 기술의 확립
2) 캐피러리 시제품 제작
나. Phi29 중합 효소 생산을 위한 DNA clone 제작 및 최적 발현 조건 확립 (2013년, 1년차)
1) 효소 발현 ORF의 확보 및 아미노산 서열 확인
2) 발현 벡터 pGS에 포함된 프로모터 및 터미네이터 사이에 삽입
3) 단백질 발현 벡터를 기주 대장균에 형질전환
4) 수용성 상태의 최적 발현 조건 확립 (SDS-PAGE로 확인)
다. 병원체 특이 프로브 3,000개 확보 (2013~2015년, 3년차)
1) 세균의 확보
2) 비교 유전체에 의한 종 또는 패소바 특이 프로브 확보
3) de novo sequencing으로 3년간 프로브의 연차별 확보
라. de novo 유전체 정보로부터 contig 30,000개 확보 (2013~2015년, 3년차)
1) de novo sequencing으로부터 기가 범위의 유전체 정보 확보
2) 3년간 연차별로 확보된 유전체 정보로부터 컨티그 작성
마. DNA free 중합 효소의 분리, 및 정제 기술 개발 (2014년, 2년차)
1) 유전자재조합 단백질의 순수 분리 기술의 확립
2) 순수 분리된 효소에 포함된 핵산 제거 방법의 확립
바. 중합 효소 최적 활성 조건 확립 (2014년, 2년차)
1) 온도, 염, 환원제, 코펙터 등의 효소 활성 최적 버퍼의 개발
2) 외부 오염 차단을 위한 효소 사용법 개발
사. 프로브의 설계, 제작 및 라벨링 방식 기술 개발 (2015년, 3년차)
1) 종 특이 아종 특이 프로브의 선발 및 제작
2) 커스텀 제작에 의한 검증용 프로브의 제작
3) 기존 dye 방식이 아닌 end 라벨링 방식에서 바이오틴 라벨링 기술의 확립
아. 진단용 칩 제작 및 표준 시료를 활용한 칩의 검증 (2015년, 3년차)
1) 커스텀 제작에 의한 검증용 프로브의 제작
2) 필드 시료를 활용한 파일럿 칩의 검증
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