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바이러스 분리
? 배양
검사 시료를 마쇄 ? 여과하여 어류주화세포
(CHSE-214
등 에 접종 배양 한 후 세포변성효과
(CPE)
를 관찰한다.
확정진단
가 혈청학적 검사
검사 시료로부터 세포 배양법으로 분리한 바이러스를 기존의 특이항체
(IPNV
항혈청 등 를 이용하
여 바이러스 특이 단백질과의 교차반응을 통하여 바이러스를 동정한다
나 면역조직학적 검사
형광색소로 표지한 특이항체를 이용하여 배양세포나 감염시료어의 조직 내에 있는 항원 바이러스
과 반응시켜 바이러스를 검출한다.
다 전자현미경 관찰
감염시료어의 장기조직 간 신장 비장 뇌 등 을 전자현미경으로 관찰하여 바이러스 입자를 확인한다
라 유전자분석 검사
(PCR )
감염시료어의 장기조직으로부터 특정 바이러스의 특이적인 유전자를 증폭시켜 특정 바이러스 감염여
부를 확인한다.
2)
바이러스 분리
배양기술
가 시료채집 및 처리
전형적인 질병증상을 나타내고 있는 폐사 직전의 병어나 폐사 직후의 병사어를
10
마리 이상 채집한
후 냉장 또는 빙장상태로 신속히 운반하여 검사에 사용하거나
-80
이하로 동결보존한다 검사용
시료는
5
1
가 작으면 어체 전체를 사용한다 시료는 멸균한 유발에 넣고 저온상태에서 잘 마쇄한 후 인산완충
(Phosphate buffer)
에 현탁시켜 원심분리해서 여과하거나 항생제를 첨가하여 세균을 제거한다
나 바이러스 분리
배양
상기 시료 마쇄액을 세포배양액으로 적당히 희석
(10~100 )
배 해서 표
에 기재한 어류주화세포에
접종하여
1~2
주간 배양하면서 접종세포의 괴사 붕괴 비대 등의 세포변성효과
(CPE)
를 확인한다
시료접종 후 어류주화세포를
14
일 이상 배양하여도 세포변성효과가 나타나지 않으면 계대배양을 실
시한다.
< . 1>
어류 주화세포 배양온도 배지 및 바이러스 감수성
어류 세포주
배양온도
배양액
바이러스 감수성
RTG - 2
10~22℃
IPNV, IHNV, VHSV, NeVTA, EHNV
CHSE - 214
10~22℃
IPNV, IHNV, NeVTA, SVC
CHH -1
10~22℃
IPNV
18~30℃
IHNV, CHV, HRV, SVCV, VHSV, EVA
18~30℃
IHNV, CHV, HRV, SVCV, VHSV, EVA
20~30℃
BF - 2
10~30℃
IPNV, EVA, EVEX, Iridovirus
EK - 1
25~35℃
L-15
Eel virus, IPNV
EO - 2
20~30℃
L-15
Eel virus, IPNV
3)
바이러스 동정기술
가 물리
화학적 특성 시험법
핵산감수성 시험
합성 저지제
(IUDR, BUDR)
를 감염세포 배양액에 첨가하여 바이러스의 증식유무를 관찰하고
바이러스가 증식하지 않으면 감염 바이러스는
바이러스이다
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