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다. 표준품: Penicillin G, sulfamethazine, streptomycin, trimethoprim
라. 페트리접시: Petri-dish (87
15 mm, 녹십자 또는 이와 동일한 규격품)
마. 디스크: 직경 6 mm paper disc (Schleicher & Schuell No. 15100 또는
Adventec No. 1995203), 지육 검사용 디스크 (직경 10 mm paper
disc, Adventec No. 1995210)
바. 기타
균질기 (Stomacher), 캘리퍼스 또는 눈금자, 원심분리관 (50 mL), 항온수조 (50 ℃),
배양기 (30 ℃), 멸균 피펫 (10 mL), Roux bottle, 외과용 메스 (No. 22) 등
3. 시험균액의 조제
가. Bs BGA 아포액 조제
1) 증류수 1 L에 해당하는 AK #2 sporulating agar (BBL) 또는 MnSO
4
2
0.05 g을 보충한 nutrient agar에 agar 5 g을 추가하여 끓인 후 Roux bottle에
250～300 mL를 분주하여 121 ℃, 15 분간 고압증기 멸균한 다음 굳힌다.
2) Nutrient agar slant로 37 ℃에서 하룻밤 배양한 종균을 멸균증류수 2~3 mL로
집균한다.
3) Roux bottle 평판에 이식하여 37 ℃, 18～24 시간 배양한 후 실온에 6 일간
방치한다.
4) 멸균 유리구슬 (직경 4 mm)과 멸균증류수 25 mL를 넣고 조심스럽게 흔들어
집균하여 멸균 원침관에 옮긴 후 항온 수조 65 ℃, 30 분간 가열한다.
5) 3 000 rpm으로 10 분간 원심 분리하여 상층액을 제거한 다음 다시 일정량의
멸균증류수를 넣어 vortex mixer로 부유시켜 원심분리한다. 이와 같이 침전물에
멸균증류수로 부유하여 원심분리하는 세척과정을 총 3회 반복한다.
6) 마지막으로 원심분리하여 상층액을 버리고 남은 침전물에 20 mL의 멸균
증류수로 재부유시켜 70 ℃, 30 분간 가열한다.
7) 이 아포원액을 plate count agar (PCA) 또는 nutrient agar를 이용해 나.항의
CFU/mL가
방법에 따라 아포액의 농도를 측정하여 멸균 증류수로 10
～10
되도록 조정한 “stock suspension” 상태로 4 ℃ 냉장보관하면서 사용한다.
8) 시험용 평판을 만들기 위하여 stock suspension 1 mL을 취하여 멸균 증류수 9 mL
CFU/mL로 희석한다 (working suspension).
또는 99 mL을 가하여 2×10
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