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나. 아포액의 농도 측정
1) 멸균증류수를 사용하여 가. 6)항의 아포원액을 10배 단계 희석하여
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이 되는 희석용액을 만든다.
2) 희석용액의 1 mL씩을 각 희석농도별 3개의 petri-dish에 분주한다. 여기에
멸균하여 약 50 ℃로 유지한 plate count agar 또는 nutrient agar 배지를
적당량 첨가하여 좌우로 잘 흔들어 희석균액과 배지를 고르게 혼합하여
굳힌다.
3) 그 위에 같은 배지를 적당량 중층시켜 굳힌 후 30 ℃ 배양기에서 48 시간
배양한다.
4) 집락수가 30～300개 되는 희석배수의 plate를 선택하여 평균집락수를 구하고
희석 농도
가. 6)항 아포원액의 mL당 아포 농도를 환산한다. 예를 들어 10
CFU/mL이다.
에서 평균 집락수가 50개일 경우, 아포 원액의 균수는 5×10
다. Ml ATCC 9341 균액
Tryptic soy broth
(TSB) 20 mL에 계대 보존균을 직경 2 mm 백금이로 1 loop를
접종하여 32 ℃ water bath에서 16 시간 진탕배양 (약 80 rpm)한다. 이 균액
1 mL를 19 mL의 멸균증류수에 희석하여 사용하며 (이때 균농도는 약
2x10
CFU/mL이 된다), 이 희석균액은 4 ℃ 냉장보관하면서 약 1 주일간
사용할 수 있다.
4. 시험용액의 조제
가. Penicillin G (PG) 용액
일정 단위 (unit)의 PG?Na 또는 PG?K 60 mg을 100 mL의 용량플라스크에
취해 멸균증류수로 표시선까지 맞춘 다음 다시 1 000 배 희석하여 1 IU/mL
(또는 0.6 μg/mL)이 되도록 희석하여 사용한다 (PG 1 unit= 0.6 μg).
나. Sulfamethazine (SMZ) 용액
100 mg의 SMZ를 100 mL의 용량플라스크에 취해 10 mL의 methanol로 녹인
다음 멸균증류수로 표시선까지 맞추어 혼합하고 (1 mg/mL) 다시 동일한 크기의
용량플라스크에 이 용액 5 mL을 취해 희석하여 사용한다 (50 μg/mL).
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