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닭도축장도계육의살모넬라위생관리지침
① 중합효소연쇄반응법(PCR법)
일반적인 중합효소연쇄반응법과 실시간 중합효소연쇄반응법(real-time
PCR법)으로 닭도축장 시료의 살모넬라균 오염을 신속하게 확인할 수 있으며,
허가된 시판 검사킷트가 이용가능하다.
② 등온유전자증폭법(LAMP법)
이 검사법은 닭도체 린스액 등에서 살모넬라균(invA 유전자)을 검출하기
위한 신속한 유전자검사법의 하나로 고가의 유전자검사 장비가 없는 간이
실험실에서도 수행할 수 있다. 또한, PMA 및 LED 장치를 이용할 경우, 소독이
빈번히 이루어지는 닭도축장 환경에서 살모넬라 생균만을 확인할 수 있는 잇점이
있다.
a. 검사 재료
- 닭도체 린스액(또는 린스액 등의 4~5시간 예비증균액)에서부터 추출한 DNA
- 살모넬라 생균 검출을 위한 시료 전처리(선택사항)
1) Propidium monoazide(PMA)를 최종 농도 100 μM이 되도록 첨가
2) 암실내 1000 lm의 LED 전등 아래(2.5 cm)에서 20분간 정치 반응
b. 반응액 조성
반응액 I
반응액 II
Reagents
Amount
Reagents
Amount
2XReactionMix.(RM)
12.5㎕
IsothermalMasterMix
15 ㎕
FIP(20pmol)
2㎕
FIP(1.6mM)
2 ㎕
BIP(20pmol)
2㎕
BIP(1.6mM)
2 ㎕
F3(20pmol)
1㎕
F3(0.8mM)
1 ㎕
B3(20pmol)
1㎕
B3(0.8mM)
1 ㎕
LoopF(20pmol)
0.25㎕
LoopF(0.2mM)
0.25 ㎕
LoopB(20pmol)
0.25㎕
LoopB(0.2mM)
0.25 ㎕
BstDNApolymerase
1㎕
DistilledWater(DW)
1.5 ㎕
DNAtemplate
FluorescentDetectionReagent(FD)
1㎕
2 ㎕
Total
25 ㎕
DistilledWater(DW)
2㎕
DNAtemplate
2㎕
Total
25㎕
LAMP용 기기 사용여부 및 종류에 따라 선택사용. 반응액 II는 Isothermal
*
MasterMix(OptiGene社) 사용시의 조성을 나타냄.

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