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베트남-한국간ODA사업관련돼지유행성설사등바이러스질병진단교육
Howtouse
1. Add10㎕ofDetectionsolution
intotheRT-PCRpremixtube.
2. Add3㎕oftemplateRNA
intothepremixtube
respectively
3. Add7㎕ofDEPCwater
intothepremixtube
tototalvolumeas20㎕
4. Dissolvethebluepelletbypipetting.
Note :The pellet is easily dissolved, by letting the mixture stand at R.T. for 1-
2minutes after adding water.
5. PerformPCRreactionofsamplesasthebelowprocess(Table2)usingPCRmachine.
[Table 1. RT-PCR volume of each component]
Component
Volume
1. i Detection Solution
10μl/tube
2. Template RNA
3μl/tube
3. DEPC water
7μl/tube
Total volume (each tube)
20μl
RT-PCRreactionprocess
[Table 2. RT-PCR reaction process]
ONE CYCLE
Reverse transcription
45℃ / 30min
Pre-Denaturation
94℃ / 5min
3-STEP CYCLING
Denaturation
94℃ / 20sec
Annealing
55℃ / 30sec
Extension
72℃ / 50sec
Number of cycles : 40 cycles
ONE CYCLE
Final Extension
72℃ / 5min
ODAprojectbetweenAPQA(Korea)andNCVD(Vietnam)
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-TrainingcourseforPorcineEpidemicDiarrheaandviraldisease

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