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Ⅸ. 소동물 질병
② Δt = (8+4)/8 - 4/8 = 1.0
③ ΣT50 = 6.0 + 1.0 = 7.0
☞ stock virus의 TCID50는 7.0(=10,000,000)
④ SN test시의 바이러스 역가를 100TCID50로 할 때 10,000,000을 100으로 나누면
100,000, 즉 1:100,000으로 희석하면 중화시험용 항원의 역가가 된다.
검사방법
1) 세포배양용 96well plate에 50㎕씩 희석용 배지(D-MEM)를 넣는다.
2) 비동화한 가검혈청을 희석용 배지를 넣은 96well plate의 첫 well에 50㎕씩 첨가한 다음
7단계 2진 희석하고, 마지막 well의 50㎕는 버린다(대조구는 혈청 대신 희석용 배지를
동일량 넣어 희석함).
3) Stock virus를 희석용 배지로 100 TCID50/50㎕의 농도로 희석하고 이를 각 검사 well에
50㎕씩 첨가한다(대조구에는 바이러스를 첨가하지 않음).
4) 바이러스 역가 측정을 위해 희석된 바이러스를 4단계로 십진 희석하여 100-0.1
TCID50/50㎕의 바이러스를 50㎕의 희석용 배지(D-MEM)를 넣은 well에 첨가한다.
5) 37℃에서 1시간 반응시킨다.
4
6) 2% FBS가 포함된 D-MEM배지에 3?10
/100㎕로 희석된 CRFK 세포를 각 well에 100㎕
씩 넣어 37℃, CO2 인큐베이터에서 72-96시간 배양하면서 세포변성효과를 관찰한다.
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② Δt = (8+4)/8 - 4/8 = 1.0
③ ΣT50 = 6.0 + 1.0 = 7.0
☞ stock virus의 TCID50는 7.0(=10,000,000)
④ SN test시의 바이러스 역가를 100TCID50로 할 때 10,000,000을 100으로 나누면
100,000, 즉 1:100,000으로 희석하면 중화시험용 항원의 역가가 된다.
검사방법
1) 세포배양용 96well plate에 50㎕씩 희석용 배지(D-MEM)를 넣는다.
2) 비동화한 가검혈청을 희석용 배지를 넣은 96well plate의 첫 well에 50㎕씩 첨가한 다음
7단계 2진 희석하고, 마지막 well의 50㎕는 버린다(대조구는 혈청 대신 희석용 배지를
동일량 넣어 희석함).
3) Stock virus를 희석용 배지로 100 TCID50/50㎕의 농도로 희석하고 이를 각 검사 well에
50㎕씩 첨가한다(대조구에는 바이러스를 첨가하지 않음).
4) 바이러스 역가 측정을 위해 희석된 바이러스를 4단계로 십진 희석하여 100-0.1
TCID50/50㎕의 바이러스를 50㎕의 희석용 배지(D-MEM)를 넣은 well에 첨가한다.
5) 37℃에서 1시간 반응시킨다.
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6) 2% FBS가 포함된 D-MEM배지에 3?10
/100㎕로 희석된 CRFK 세포를 각 well에 100㎕
씩 넣어 37℃, CO2 인큐베이터에서 72-96시간 배양하면서 세포변성효과를 관찰한다.
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