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동물질병 표준진단요령
혈청중화시험에서의 바이러스 back titration
1) Back titration위해 각 희석단계별로 4 well씩 50㎕의 배지를 가한다.
2) 3개의 시험관에 0.9㎖의 희석액(혈청 비포함 D-MEM)을 가한다.
3) 중화시험에 사용하기위해 희석한 stock virus(100 TCID50/50㎕) 현탁액을 첫번째 튜브에
0.1㎖ 더한다.
4) 6-7번 피펫팅한 다음, 0.1㎖를 덜어내어 두번째 튜브로 옮긴다.
주의) 사용한 피펫은 버린다.
5) 같은 방법으로 tube No.2, 및 No.3으로 희석을 실시한다.
6) 각각다른피펫을사용하여각희석배율별로해당well에희석바이러스를50㎕씩접종한다.
결과적으로 바이러스가 10배 희석되어 100, 10, 1, 0.1 TCID50/100ul 농도가 되도록 한다.
7) 37℃ CO2 incubator에서 48~72시간 배양한 다음, CPE를 관찰 기록한다.
8) Karber method로 역가를 산출한다.
※ 이상적인 항원 바이러스의 역가는 100 TCID50/50㎕이나 back titration의 결과가
30~300 TCID50/50㎕이면 실험결과에 신뢰성을 부여할 수 있다.
판정기준
1) 대조구세포에어떠한세포변성반응이나오염이되어서는안되며항체역가는세포변성효과를
일으키지 않은 최대 희석배수의 역수이다.
CRFK세포
고양이파보바이러스에감염된 CRFK세포
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