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[ 붙임 ] 1. 꿀벌 기문응애의 PCR 진단법
표
준
1. 준비물
기
○ 가검시료 : 바이러스성 질병에 감염되었거나 의심되는 꿀벌, 애벌레 등 시료
술
○ PCR 재료 : DNA extraction kit, PCR kit, Primer등
활
2. PCR 프라이머
용
○ 프라이머 제작
Name
Primer sequence(5' →3')
size(bp)
Forward 5`-CAG TAG GGC TAG ATA TCG ATA CCC GAG CTT-3`
Acar
247
Reverse 5`-TGA GCT ACA ACA TAA TAT CTG TCA TGA AGA-3`
3. 방법
1) DNA 추출 및 PCR
○ DNA 추출 키트를 이용하여 가검물(꿀벌, 애벌레 등)로부터 total DNA를 추출하여 Template로
사용한다.
○ PCR kit를 이용하여 각각의 primer, total DNA 등을 아래의 비율과 같이 잘 섞어준다.
Primer F
1.0㎕
Primer R
1.0㎕
PCR Buffer Enzyme Mix
1 tube
D.W.
13.0㎕
DNA(test sample)
5.0㎕
Total
20.0㎕
○ Thermocycler를 이용하여 PCR을 다음과 같이 실시한다.
PCR 단계
반응시간 및 온도
증폭 Cycle
Denaturation
98℃, 10sec
Annealing
55℃, 30sec
34 cycles
Extension
68℃, 30sec
Final Extension
68℃, 30sec
1 cycle
383

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