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[ 붙임 ] 1. 닭 전염성 빈혈 바이러스 유전자 검사법
연
구
1. 진단방법 개요
성
닭 전염성 빈혈증으로 의심되는 닭의 조직 유제액을 이용하여 VP1 구조단백질 유전자 부위를
과
증폭함으로써 닭 전염성 빈혈증 감염을 확인하고 유전자 분석이 가능한 항원검사법을 보급함
활
용
2. 시험방법
집
가. 재료
1) 임상증상이 있는 가검물의 조직 유제액(간, 비장, 흉선 등)
2) 유전자 추출 및 증폭에 필요한 시약
3) PCR machine
4) Gel documentation system
나. 방법
닭 전염성 빈혈증의 구조단백질 유전자(VP1 gene)를 중합효소연쇄반응 (Polymerase
Chain Reaction, PCR) 기법을 이용하여 특이적으로 검출함
(1) DNA 추출 : 상용화 제품 사용(Qiagen, Intron 등)
(2) 반응시약 : 상용화 제품 사용((예) Accupower PCR premix, Ex-taq polymerase 등)
(3) 유전자 검사법 primers
- 진단용 PCR primers
증폭부위
Primers
Sequences(5' to 3')
증폭크기
VP1- 2F
GCG AGA GTC GCC AAG ATY T
Frag 2
약 525 bp
VP1- 2R
TAC TGT TGC TCG TCG GGT CT
- 유전자 계통분석용 nPCR primers
증폭부위
Primers
Sequences(5' to 3')
증폭크기
VP1-0F
CCT CGA AGA AGC GAT CCT G
First
Frag 0
약 1.6kb
VP1-0R
CAC TCG GAA TGC GAT TGT G
VP1-1F
GAG TAC AGG GTA AGC GAG CTA
Frag 1
약 532 bp
VP1-1R
AGG GCA CGT TAT TAT CTA GCG
VP1-2F
GCG AGA GTC GCC AAG ATY T
VP1
Frag 2
약 525 bp
VP1-2R
TAC TGT TGC TCG TCG GGT CT
Nested
VP1-3F
CTG TTC CGA CAC ATT GAA ACC
Frag 3
약 731 bp
VP1-3R
CCC CAG TAC ATG GTG CTG TT
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