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하여 프리온 특이 항혈청생산
표
- S1 항혈청 생산
준
○ 영국 수의연구청에 국내 생산 프리온 특이 단클론항체에 대한 면역조직화학염색법 및 면역
블로팅법 적용시험을 통한 진단항체로써의 가능성 확인된 항체 선발(2008년)
기
- 면역조직화학염색법 : BL391 항체
술
- 면역블로팅법 : N18-5 및 S1항체
활
○ 소해면상뇌증 진단에 있어 조직내 변형프리온을 신속진단(항원 ELISA), 면역조직화학염색법
용
및 면역블로팅법에 국내 생산된 단클론항체 및 항혈청을 활용한 소해면상뇌증 진단액 및
진단법의 표준화
○ 시약의 구성
1) 신속검사(항원 ELISA) TeSeE ELISA(시판 킷트, Bio-Rad), Herd Check BSE Antigen kit
(시판킷트, IDEXX)
2) 면역조직화학염색법
- 1X anti-prion Monoclonal antibody(Mab) : 항체 클론명(BL391), 시판항체(F99, VMRD)
3) 면역블로팅법
- 1X anti-prion Monoclonal antibody(Mab) : 항체 클론명(N18-5), 시판항체(6H4, Prionics)
- 1X rabbit prion antiserum : S1
4) PMCA-WB : PMCA buffer, 정상뇌조직 등
○ 검사방법
1) 신속검사(항원 ELISA) TeSeE ELISA, Herd Check BSE Antigen kit
- 검사에 사용할 조직준비 : 20% 뇌유제액
- TeSeE ELISA kit : 전처리(PK 전처리 후 변형프리온 농축)후 ELISA 수행
- HerdCheck BSE Antigen kit : diluent로 희석후 conditioning buffer로 denature
2) 면역조직화학염색법
- 검사에 사용할 조직 준비 : 포르말린 고정 파라핀 포매조직 두께 : 2㎛
- 88% formic acid 및 고압멸균기를 이용한 항원노출화 과정(121℃ 30분)을 통하여 항원
노출
- 1X anti-prion Monoclonal antibody(Mab)항에 : BL391을 1 : 500, F99는 1 : 250으로
희석사용
- 자동화면역염색기 이용
3) 면역블로팅
- 검사에 사용할 조직준비 : 10% 뇌유제액
- 1X anti-prion Monoclonal antibody(Mab)항에 : S1을 1㎍/㎖, N18-5을 2㎍/㎖, 6H4
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