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4) 88% Formic acid로 1시간 처리(변형프리온 불활화 과정)한다.
표
5) 흐르는 물에 1시간 세척한다.
준
6) 조직 처리기에서 수행한다.
기
Model No. : Shandon pathcentre 1-Day Protocol(19 : 59)
술
Time
temperature
Pressure/
Drain
Reagent
Station
Stir
활
(Hr : Min)
(C)
vaccum
(sec)
Ethanol 70%
1
1 : 30
Amb
N
30
ON
용
Ethanol 70%
2
1 : 45
Amb
N
30
ON
Ethanol 90%
3
1 : 00
Amb
V
30
ON
Ethanol 90%
4
1 : 00
Amb
V
30
ON
Abs Ethanol
5
1 : 30
Amb
V
30
ON
Abs Ethanol
6
1 : 00
Amb
V
30
ON
Abs Ethanol
7
1 : 00
Amb
V
30
ON
chloroform
8
2 : 30
Amb
V
30
ON
chloroform
9
3 : 00
Amb
V
60
ON
Fibrowax
11
1 : 30
62
V
120
ON
Fibrowax
12
3 : 00
60
V
120
ON
○ 10% Buffered neutral formalin 제조법
37-40% formalin 100㎖, D.W. 900㎖, Sodium phosphate monobasic 4g, Sodium
phosphate dibasic(anhydrous) 6.5g
□ 면역조직화학염색법(Immunohistochemistry, IHC)
1. 슬라이드와 시약 준비
포르말린 고정 파라핀 포매 조직을 2.0um를 잘라서 VWR micro slide(superfrost plus VWR
Cat No. 48311-703)에 부착한다. 슬라이드 건조기에서 38℃ 하룻밤 건조시킨다. 슬라이드 부착
율을 높이기 위해 60℃에서 5분간 더 반응한다. 면역조직화학염색을 위해 새로 박절 된 조직을
이용하는 것이 좋으나 양성 및 음성 대조군은 100개들이 슬라이드박스에 실온에서 4주간 보관
할 수 있다. 좀더 장기간 보관은 권장하지 않는다. 모든 시약은 Milipore 증류수(pH 6.34)로
만들어져야 한다.
F99는 VMRD에서 생산된 단클론항체로서 냉동상태로 1.0㎎/㎖(PBS + 4㎎/㎖ BSA + 0.09%
sodium azide)의 농도로 공급된다. BL391은 농림수산검역검사본부에서 생산된 항체로 냉동보관
하며 이들 항체의 보관은 -80℃에 최소 50㎕씩 분주하여 보관한다. 전염성해면상뇌증 진단을
위해 농림수산검역검사본부는 F99 1/200, BL391 1/1000 또는1/500농도로 희석하여 사용한다.
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표
5) 흐르는 물에 1시간 세척한다.
준
6) 조직 처리기에서 수행한다.
기
Model No. : Shandon pathcentre 1-Day Protocol(19 : 59)
술
Time
temperature
Pressure/
Drain
Reagent
Station
Stir
활
(Hr : Min)
(C)
vaccum
(sec)
Ethanol 70%
1
1 : 30
Amb
N
30
ON
용
Ethanol 70%
2
1 : 45
Amb
N
30
ON
Ethanol 90%
3
1 : 00
Amb
V
30
ON
Ethanol 90%
4
1 : 00
Amb
V
30
ON
Abs Ethanol
5
1 : 30
Amb
V
30
ON
Abs Ethanol
6
1 : 00
Amb
V
30
ON
Abs Ethanol
7
1 : 00
Amb
V
30
ON
chloroform
8
2 : 30
Amb
V
30
ON
chloroform
9
3 : 00
Amb
V
60
ON
Fibrowax
11
1 : 30
62
V
120
ON
Fibrowax
12
3 : 00
60
V
120
ON
○ 10% Buffered neutral formalin 제조법
37-40% formalin 100㎖, D.W. 900㎖, Sodium phosphate monobasic 4g, Sodium
phosphate dibasic(anhydrous) 6.5g
□ 면역조직화학염색법(Immunohistochemistry, IHC)
1. 슬라이드와 시약 준비
포르말린 고정 파라핀 포매 조직을 2.0um를 잘라서 VWR micro slide(superfrost plus VWR
Cat No. 48311-703)에 부착한다. 슬라이드 건조기에서 38℃ 하룻밤 건조시킨다. 슬라이드 부착
율을 높이기 위해 60℃에서 5분간 더 반응한다. 면역조직화학염색을 위해 새로 박절 된 조직을
이용하는 것이 좋으나 양성 및 음성 대조군은 100개들이 슬라이드박스에 실온에서 4주간 보관
할 수 있다. 좀더 장기간 보관은 권장하지 않는다. 모든 시약은 Milipore 증류수(pH 6.34)로
만들어져야 한다.
F99는 VMRD에서 생산된 단클론항체로서 냉동상태로 1.0㎎/㎖(PBS + 4㎎/㎖ BSA + 0.09%
sodium azide)의 농도로 공급된다. BL391은 농림수산검역검사본부에서 생산된 항체로 냉동보관
하며 이들 항체의 보관은 -80℃에 최소 50㎕씩 분주하여 보관한다. 전염성해면상뇌증 진단을
위해 농림수산검역검사본부는 F99 1/200, BL391 1/1000 또는1/500농도로 희석하여 사용한다.
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