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○ 10% Buffered neutral formalin 제조법
37-40% formalin 100㎖, D.W. 900ml, Sodium phosphate monobasic 4g, Sodium
연
구
phosphate dibasic(anhydrous) 6.5g
성
과
□ 면역조직화학염색법(Immunohistochemistry, IHC)
활
1. 슬라이드와 시약 준비
용
포르말린 고정 파라핀 포매 조직을 2.0um를 잘라서 VWR micro slide(superfrost plus VWR
집
Cat No. 48311-703)에 부착한다. 슬라이드 건조기에서 38℃ 하룻밤 건조시킨다. 슬라이드 부착
율을 높이기 위해 60℃에서 5분간 더 반응한다. 면역조직화학염색을 위해 새로 박절 된 조직을
이용하는 것이 좋으나 양성 및 음성 대조군은 100개들이 슬라이드박스에 실온에서 4주간 보관
할 수 있다. 좀더 장기간 보관은 권장하지 않는다. 모든 시약은 Milipore 증류수(pH 6.34)로
만들어져야 한다.
F99는 VMRD에서 생산된 단클론항체로서 냉동상태로 1.0mg/㎖(PBS + 4mg/㎖ BSA +
0.09% sodium azide)의 농도로 공급된다. 8E74, BL391은 농림수산검역검사본부에서 생산된 항체로
냉동보관하며 이들 항체의 보관은 -80℃에 최소 50㎕씩 분주하여 보관한다. 전염성해면상뇌증
진단을 위해 농림수산검역검사본부는 F99 1/200, 8E74 1/300, BL391 1/1000 또는1/500농도로
희석하여 사용한다. 처음 녹인 이후에 남은 용액은 10㎕씩 분주하여 -20℃에 보관한다(F99의
경우 한번에 20개의 slide를 실시할 수 있으며 2㎖의 용량이 필요하며 10㎕가 소요됨).
○ 시약 및 시약제조 방법
시약
제조방법
Formic Acid 98%
희석하지 않은 농축된 시판시약
(JUNSEI Co.)
Epitope Demasking solution
DAKO ChemMate Target Retrieval solution buffer
(ChemMate
제조사의 유효기간까지 4℃에서 보관
Target Retrieval solution :
사용 전에 증류수로 1 : 10으로 희석하여 사용함
0.01mol/L Citrate buffer pH 6)
Fresh 3% Hydrogen Peroxide in Methanol
Endogenous Peroxidase Block
(30% Hydrogen Peroxide을 1 : 10으로 희석하여 사용 Cat
No. Applicam A1134.0500, 4℃ 보관)
Tris Buffered Saline-
Trizma HCl(29.8g) + 증류수(2ℓ) + Triton-X100(10㎖) 4℃에서
TritonX-100(TTB)
6개월간 보관가능
3% Normal Horse Serum(Gibco 16050-122, Aliquoted 50㎖ at
일차항체 희석액
-20℃)을 TTB로 희석한 용액
만들어진 시약은 4℃에서 2개월간 사용가능
검출시약
Ventana ultraview Red kit(250 heads/kit)
25㎖ AP Red Enhancer, 25㎖ AP Red Multimer, 25㎖ AP
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