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젖소 유방염 원인균 분리·동정 및 항생제 감수성 검사
제5장? 분리 균 보관 방법
통상적으로 -70℃이하의 deep freezer에 보관하는 방법이 일반적으로 이용되고 있다. 액체
배지를 이용하여 세균을 증균한 후 DMSO나 glycerol등의 동결보호제를 일정 비율로 첨가하여
동결과정중의 세포손상을 최소화 한다. 한천 배지에서 증식한 세균을 현탁하여 저장하는 방법이
사용된다.
1 세균배양
보존균주는 한천 또는 액체 배지에 접종하여 late growth phase 또는 stationary phase가
되도록 18~24시간 배양한다.
2 보존배지 준비
20%되게 Glycerol를 제조한 다음 121℃ 15분간 멸균하거나 brucella broth w/20%
glycerol을 구입하여 사용한다. 또한 상품화된 bead를 이용할 수도 있다.
3 세균현탁액 준비
동결보호제로는 glycerol를 이용한다. 영양 배지의 균 혼탁액과 동결 보호제를 적절한 비율로
혼합하여 한 균주 당 1∼2㎖씩 cryovial tube에 분주한다. Glycerol 최종 농도가 2~15% 되게
한다. 보존 배지는 일부를 혈액 한천에 접종하고, 37℃에서 하룻밤 배양하여 무균 여부를 확인한다.
한천배지에 배양한 균은 루프를 이용하여 균을 수거하여 바로 현탁하여 사용할 수 있다.
4 냉동 및 보존
대부분의 균종은 uncontrolled-rate freezing으로 냉동하여도 무방하나 Campylobacter
spp.등 보존이 어려운 일부 균종은 -30℃까지는 1분에 1℃씩 온도를 낮추는 controlled-rate
freezing으로 냉동한다. 보관은 -70℃ 초저온 냉동고에 보관하고 보관된 균주의 list를 작성하고
수시로 냉동고 온도를 점검한다.
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