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Ⅳ-1. 동물질병예방관리기술개발연구
Ⅲ. 연구방법 및 수행전략
1. 재 료
가. 바이러스 : 구제역 바이러스(국내분리 및 백신주 바이러스)
나. 유전자 : O1 Manisa 감염성 전체 cDNA plasmid
다. 세포 : BHK-21(Baby hamster kidney cell), ZZ-R(fetal goat tongue cell),
IBRS-2(Swine kidney cell) 등
라. 동물 : 마우스
2. 연구전략 및 방법
가. 1차년도목표(2014):특정유전자결손감염성구제역바이러스전체cDNA및바이러스
증식용 보조 세포주(helper cell) 제작
1) 구제역바이러스의 구조 및 비구조단백질 유전자 중 특정 유전자를 결손시킨 감염성
구제역바이러스 전체 cDNA 작성
- 구제역 바이러스 P1 단백질 중 특정 구조단백질 암호화 유전자 결손 감염성 구제역
전체 cDNA 작성
- 구제역 바이러스 3ABC 단백질 중 특정 비구조단백질 암호화 유전자 결손 감염성
구제역 전체 cDNA 작성
2) 특정 구제역 바이러스 단백질 발현 세포주(helper cell) 작성
- 렌티바이러스발현시스템이용BHK,ZZR및IBSR2세포에서특정구제역바이러스
구조단백질 발현 세포주(helper cell) 작성
- 렌티바이러스 발현시스템 이용 BHK, ZZR 및 IBSR2 세포에서 특정 구제역 바이러스
비구조단백질 발현 helper cell 작성
나. 2차년도 목표(2015) : 일회증식(single cycle) 구제역바이러스 생산
1) helper cell을 이용한 일회 증식 구제역바이러스 작성 및 확인
-특정 구제역 바이러스 유전자 결손 감염성 cDNA 이용 Helper cell에서의 일회 증식
구제역바이러스 생산여부 확인
2) 다양한구제역감수성세포주(helper)에서의구제역바이러스회수및바이러스단백질
발현 확인
-구제역 바이러스 및 구조단백질 발현 유무 확인
3) 일회 증식 구제역바이러스의 활용성 평가
-일회 증식 바이러스의 안전성 및 면역원성 조사
-일회 증식 바이러스를 이용한 세포기반 중화항체 검사능 평가
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