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Ⅳ
.
고 찰
본 실험에서
CPV-vp2
전체유전자를 식물발현벡터 종에 삽입하였다 식물
2
.
genomic
DNA
로의 유전자 삽입은
agrobacteria
를 사용하였다 식물발현벡터에 사용할
.
promoter
는
Dual 35S promoter(pV018)
와
SEN1 promoter(pV030)
를 이용하였다
.
특히
SEN1
promoter
는
stress protein
을 발현하는데 작동하는
promoter
로 주로 암 처리 등의
stress
요인에 작동한다 따라서
.
, SEN1 promoter
를 이용한 식물발현 벡터에 유전자를
삽입하여 애기장대에 형질전환한 식물체의 경우 단백질의 발현여부를 판단하기 위해
일정시간 암 처리하여 발현을 유도하고 식물의 잎에서 단백질의 발현여부를 확인하였
다 식물형질전환체는
.
pV018
벡터를 이용하여
16 , pV030
종
벡터를 이용하여
187
종을 작
성하여 그 중
pV030
벡터로 작성된 식물형질전환체
11
종에서
vp-2
단백질이 미약하나마
발현되고 있음을 확인하였다 또한 이들 단백질 발현 식물체로부터
.
,
vp-2
유전자의
증폭 및 염기서열 분석을 통하여 단백질 발현을 간접적으로 증명할 수 있었다 단백질
.
의 발현량은 식물
genome
의 어느 부위로 식물발현벡터가 삽입되느냐에 따라 크게 달라
질 수 있으므로 반복적인 실험을 통해 발현량이 많은 식물체를 선발하는 것이 중요하
,
다 현재까지는
.
pV018
보다는
pV030
발현벡터를 사용하였을 때 보다 발현량이 많은 것으
로 보인다.
CPV-vp2
유전자의
5‘
말단부위에는 중화능이 있는
epitope 2
개가 존재하며 이들만
,
을 클로닝하여 식물에서 발현하기 위한 전략으로 개의
2
epitope
을 포함하는
60bp
의 유
전자를
PCR
방법으로 증폭하여 재조합 베큘로 바이러스에서 발현하기 위해
transfer
vector
에 삽입하였다
.
향후에는
CPV-vp2
단백질의 발현량이 많은 식물을 제작 및 선발하기 위하여 지속적
으로
CPV-vp2
전체 유전자가 삽입된 새로운 형질전환 식물체를 생산하여 발현량이 많
은 형질전환식물체를 선발할 것이며 효과적이고 강력한 면역성을 유발하기 위하여 단
,
백질의 특정부위를
(epitope)
발현하는 식물체 제작을 위해 유전자조작 및 발현 발현
,
량 확인 등의 과정을 지속적으로 수행할 것이다.
Ⅴ
.
결 론
1. CPV-VP2
유전자 삽입한 종의 식물발현 벡터 작성
2
(pV030, pV018)
2. CPV-VP2
유전자 삽입 벡터
(pV030, pV018)
를 이용하여
pV030
으로 형질전환된
184
종의 식물체와
pV018
로 형질전환된
16
종의 식물체를 배양하였다
.
3. 형질전환된 식물체를
ELISA, HA, Immuno-dot
로 검사한 결과
pV018
로 형질전
환된 16
종과
pV030
으로 형질전환된
176
종의 식물체는 차 검사까지 모두 음성으로 나타났
2
고
, pV030
으로 형질전환된
11
종은 차 검사에서 약한 양성반응을 나타내었으며
1
, 2

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