총 1393페이지

나 폐 조직을 이용한
.
IFA
와
MP-PCR
비교시험 결과
1)
원인체에 따라
42.2%~100.0%
에 이르기까지 다양한 정도의 민감도와 특
이도를 나타냄.
A. pleuropneumoniae가
2) IFA
와
MP-PCR
결과의 일치율은
48.7%
로 가장
낮았으며
PCV
가
95.0%
로 가장 높았음
Ⅴ. 고찰
돼지 주요 호흡기질병의 신속감별진단법으로
2
차년도까지 개발했던
MP-PCR
법의 경우는 편도 림프절 악하 폐 서혜부
,
(
,
,
),
폐 비즙 혈액 등 각종 정상 시료에
,
,
R
6
종의 표준균주를 접종하여
RNaesy Kit(QIAGEN
)로 유전자를 추출한 것과 별
도로 정상 폐 조직 내 표준균주를 혼합한 다음, 세균성 호흡기질병인 B.
bronchiseptica(Bb), P. multocida(PmD/Pm), M. hyopneumoniae(Mh), A.
pleuropneumoniae(
App)
는
DNaesy Tisssue Kit(QIAGENR)를 이용하여 유전
자를 추출하였고
,
나머지
Porcine Circo Virus(PCV)
는
Ultrasens Virus
Kit(QIAGENR),
Porcine
Reproductive
Respiratory
Syndrome
Virus(PRRSV)
는
RNaesy Kit(QIAGENR)를 각각 이용하여 유전자를 추출한 다
음
MP-PCR
을 수행했다
.
그러나, 이러한
MP-PCR
기법은 시료별 또는 원인체별 유전자의 추출 방법이
다르고 또한 복잡한 과정을 거치게 되면서 민감도와 특이도 저하 현상을 초래하
,
였고 또한 현재까지 개발된 고 비용의
,
MP-PCR
은 경제적 손실이 크게 발생됨으
로써 시도 가축방역기관에 진단법으로 보급 하더라도 예산상의 어려움 등으로 인
해 실제 현장 진단법으로의 효용성이 될 의문시 되었다 그리하여 민감도와 특이
.
도를 높이기 위해 전면적으로 차년도 상반기에 주요 돼지 호흡기질병 원인체
3
6
종에 대한 총 쌍의 특이
7
primer design
을 새롭게 작성하고자 일부 표준균주의
band size
를 수정 보완하였다
. A. pleuropneumoniae의 경우는 812bp →
396bp
→
197bp
로 최종 조정되었으며
,
M. hyopneumoniae의 경우는 847bp
→
643bp
→
366bp ,
로 또한
PRRS
의 경우는
312bp
→
96~105bp
→
305bp
로
최종 수정되었다 그리고 최근 국내
.
,
PMWS
감염실태를 조사한 결과 바이러스성
원인체중
PCV-2
외
PRRS
와
PPV
가 복합감염된 사례 증가로 인해 개발 중인 진
단법에 이 원인체도 새롭게 추가하여
Porcine parvovirus
를
588bp
조건으로 확
립
, 2
차년도까지 개발했던
MP-PCR
을 전면적으로 수정 보완하여 차년도 상반기
3
에 새롭게 개발한
MP-PCR
을 진행하게 되었다
.
돼지 주요 호흡기질병 종의 원인체에 대한 동시 검색이 가능한
6
MP-PCR
기초
조건을
Pre-hot step
은
95
℃
에서
15 , Denaturation step
분
은
94
℃
에서
30 ,
초
Annealing step
은
53.6
℃
에서
90 , Extension step
초
은
72
℃
에서
90 , Final
초

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