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extension step
은
72
℃
에서
10
분간 총
35cycles
로 설정한 뒤 전년도까지 개발
,
한
MP-PCR
조건과 비교한 결과 대부분 양호한 결과를 나타냈었다
.
한편
, MP-PCR
의 민감도 측면은 최초
QIAGEN two-tube MP-PCR kit
나 새
롭게 원인체를 추가하여 구성한
one-step two-tube MP-PCR kit
모두에서 표
준 균주 자체만 검색하는 경우보다 가검 조직내 표준 균주를 접종한 경우는 민감
1
도가 10
정도 저하되는 양상이 나타남을 확인할 수 있었다 또한 가검 시료별
.
( ,
폐 림프절 편도 등 민감도는 원인체별로 다양했는데 이는 각종 질병의 병원체
,
)
,
의 특성 및 병원체 또는 병성기전에 의한 개체별 병원체 감염진행 정도 병원체
,
양과 가검 조직의 성분 등 다양한 요인에 의해 나타난 것으로 추정되며 특정 조직
별 민감도 저하 요인은 거의 없는 것으로 사료되었다.
그리고
2004
년과
2005
년 상반기 병성감정 의뢰된 일부 시료 중 돼지 호흡기질병으로 최종
진단된 폐 조직
100
건에 대해
MP-PCR
을 실시한 결과 단독감염 건수는 총
,
50
건 중
PRRS(34 ; 68%)> PCV(15 ; 30%)>Bb(1 ; 2%)
건
건
건
순으로 나타났으며 종 혼합 감염된
, 2
25
건은
PCV+PRRS(17 ; 68%)> PCV+App(5 ; 20%)> PCV+PD(2 ; 8%)>
건
건
건
PCV+Bb(1 ; 4%)
건
순이었다 한편
.
3
종 혼합 감염된 경우는
PCV+App+PRRS(3
건
;37.5%)>PCV+PD+PRRS(2 ;25%), PCV+App+PD(2 ; 25%)>, PCV+App+Mh
건
건
가
(1 ; 2.5%)
건
순이었다 돼지 호흡기질병으로 진단된
.
100
건의 병성감정시료에 대한
MP-
PCR
진단법에서 검출하는 종 원인체의 유전자 존재 여부 조사 결과
6
, PRRS 56 (56%),
가
건
PCV
가
48 (48%), App
건
가
11 (11%), PD
건
가 건
6 (6%), Bb
가 건
1 (1%), Mh
가 건
1 (1%)
으로 검출 되었다 이 결과를 놓고 볼 때 일선 양돈장은 돼지 호흡기질병에서 검사대상 종
.
,
6
원인체중에서 바이러스 질병인
PRRS
는 생독백신이 일부 검출되었다고 추정하더라도 야외
감염으로 인한
PRRS PCV
와
가 높게 검색된 것으로 보아
PMWS PRDC
와
에 심각하게 노출
되어 있음을 확인할 수 있었다.
그러나 개발된
,
two tube MP-PCR
을 일선 가축방역기관 등에 보급시켜 현장
시료에 대한 진단법으로 활용하기에는 시간 및 경제성 등 실용성이 낮아 민감성,
특이성 외에 신속성 및 경제성 등을 종합적으로 고려할 때 개선 보완된 새로운 진
단법이 요구되어
, PCR
용
tube
내 검사대상
primer
가 들어가 있는 상태에서 야외
시료로부터 추출된
DNA
나
RNA
유전자만 추가하는
One-step premix tube
를
개발하고자 하였다 따라서 기존
.
premix tube
기술을 보유하고 있던
Bioneer
사
와 기술교류를 통하여 보다 많은 돼지 호흡기질병 원인체를 신속 정확하게 진단할
수 있는
One-step premix MP-PCR
을 개발하였다
.
이렇게 개발된
One-step premix tube MP-PCR
을 폐 가검 조직에 적용한 결
과
PCV
는 대부분의 폐 가검 조직에서 검출되어 기존의
MP-PCR
검사한 경우와
동일하게 국내 대부분의 양돈장에
PCV
가 상재되어 있음을 알 수 있었다 또한 일
.
부 원인체는
single PCR
수준의 민감도를 나타내었고
, One step premix tube
single PCR kit
과
MP PCR kit
로 구분하여 동일 시료 검색 결과
Mh, Bb, App,
PRRS 4
종은
100%, PCV
는
98%, Pm
은
62.5%
의 일치율을 나타내었다 또한 폐
.
은
72
℃
에서
10
분간 총
35cycles
로 설정한 뒤 전년도까지 개발
,
한
MP-PCR
조건과 비교한 결과 대부분 양호한 결과를 나타냈었다
.
한편
, MP-PCR
의 민감도 측면은 최초
QIAGEN two-tube MP-PCR kit
나 새
롭게 원인체를 추가하여 구성한
one-step two-tube MP-PCR kit
모두에서 표
준 균주 자체만 검색하는 경우보다 가검 조직내 표준 균주를 접종한 경우는 민감
1
도가 10
정도 저하되는 양상이 나타남을 확인할 수 있었다 또한 가검 시료별
.
( ,
폐 림프절 편도 등 민감도는 원인체별로 다양했는데 이는 각종 질병의 병원체
,
)
,
의 특성 및 병원체 또는 병성기전에 의한 개체별 병원체 감염진행 정도 병원체
,
양과 가검 조직의 성분 등 다양한 요인에 의해 나타난 것으로 추정되며 특정 조직
별 민감도 저하 요인은 거의 없는 것으로 사료되었다.
그리고
2004
년과
2005
년 상반기 병성감정 의뢰된 일부 시료 중 돼지 호흡기질병으로 최종
진단된 폐 조직
100
건에 대해
MP-PCR
을 실시한 결과 단독감염 건수는 총
,
50
건 중
PRRS(34 ; 68%)> PCV(15 ; 30%)>Bb(1 ; 2%)
건
건
건
순으로 나타났으며 종 혼합 감염된
, 2
25
건은
PCV+PRRS(17 ; 68%)> PCV+App(5 ; 20%)> PCV+PD(2 ; 8%)>
건
건
건
PCV+Bb(1 ; 4%)
건
순이었다 한편
.
3
종 혼합 감염된 경우는
PCV+App+PRRS(3
건
;37.5%)>PCV+PD+PRRS(2 ;25%), PCV+App+PD(2 ; 25%)>, PCV+App+Mh
건
건
가
(1 ; 2.5%)
건
순이었다 돼지 호흡기질병으로 진단된
.
100
건의 병성감정시료에 대한
MP-
PCR
진단법에서 검출하는 종 원인체의 유전자 존재 여부 조사 결과
6
, PRRS 56 (56%),
가
건
PCV
가
48 (48%), App
건
가
11 (11%), PD
건
가 건
6 (6%), Bb
가 건
1 (1%), Mh
가 건
1 (1%)
으로 검출 되었다 이 결과를 놓고 볼 때 일선 양돈장은 돼지 호흡기질병에서 검사대상 종
.
,
6
원인체중에서 바이러스 질병인
PRRS
는 생독백신이 일부 검출되었다고 추정하더라도 야외
감염으로 인한
PRRS PCV
와
가 높게 검색된 것으로 보아
PMWS PRDC
와
에 심각하게 노출
되어 있음을 확인할 수 있었다.
그러나 개발된
,
two tube MP-PCR
을 일선 가축방역기관 등에 보급시켜 현장
시료에 대한 진단법으로 활용하기에는 시간 및 경제성 등 실용성이 낮아 민감성,
특이성 외에 신속성 및 경제성 등을 종합적으로 고려할 때 개선 보완된 새로운 진
단법이 요구되어
, PCR
용
tube
내 검사대상
primer
가 들어가 있는 상태에서 야외
시료로부터 추출된
DNA
나
RNA
유전자만 추가하는
One-step premix tube
를
개발하고자 하였다 따라서 기존
.
premix tube
기술을 보유하고 있던
Bioneer
사
와 기술교류를 통하여 보다 많은 돼지 호흡기질병 원인체를 신속 정확하게 진단할
수 있는
One-step premix MP-PCR
을 개발하였다
.
이렇게 개발된
One-step premix tube MP-PCR
을 폐 가검 조직에 적용한 결
과
PCV
는 대부분의 폐 가검 조직에서 검출되어 기존의
MP-PCR
검사한 경우와
동일하게 국내 대부분의 양돈장에
PCV
가 상재되어 있음을 알 수 있었다 또한 일
.
부 원인체는
single PCR
수준의 민감도를 나타내었고
, One step premix tube
single PCR kit
과
MP PCR kit
로 구분하여 동일 시료 검색 결과
Mh, Bb, App,
PRRS 4
종은
100%, PCV
는
98%, Pm
은
62.5%
의 일치율을 나타내었다 또한 폐
.
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