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?ITSF 배지에서8일간배양후에둥근집락상태를 유지하면서주변부세포들의탈락이
마우스배아암세포의작출법은마우스배아줄기세포의접종부위및투여기간에따라여
관찰됨
러가지변형방법이있을수있으나, 본연구에서는투여부위를하배부(flank)피하와마
? 신경전구세포 특이 발현 단백질인 CK8(녹색형광)과 NESTIN(적색형광) 항원에 대해
우스고환을선택하였으며, 투여기간으로는45일, 57일, 60일을선택하였고공시세포로는
면역조직화학염색법으로 발현도를 확인한 결과 2차 분화배양 후 양성반응을나타내어
2006년우리원에서작출한마우스배아줄기세포와상업적으로판매되는마우스배아줄기세
포를 이용하였다. 일정시간 경과 후, 얻어진 teratoma조직을 1차 항체(anti-SSEA-1)와
배상체에서신경세포로분화중임을확인하였음
microbead가결합된2차항체를이용해마우스배아암세포만을순수분리하여유지배양하
였다. 적정배지조건을확립하고마우스배아줄기세포의성상확인법(Illmensee and Mintz,
Ⅴ. 고찰
1976; Martin, 1981)을준용하여작출한마우스배아암세포의특성을파악한결과, 투여
다장기분화능을지닌미분화된마우스배아줄기세포관련기술은다양한생명공학응용
부위및투여기간과상관없이모두teratoma가형성되었으며, 이teratoma를이용하여
연구가가능하기때문에생명과학기술의핵심으로여겨지고있으며, 이와관련된유지배
성공적으로배아암세포를작출할수있었다. 그러나투여부위중하복부피하보다는고환
양 기술 및 작출법 등은 다음 단계의 연구 진행을 위한 필수요건으로 여겨지고 있
에서뚜렷하고큰teratoma조직을관찰할수있었는데이는마우스고환조직이증식이
다.(Evans and Kaufman, 1981; Rippon and Bishop, 2004; Wobus, 2003)
왕성하기때문인것으로사료된다. 작출된배아암세포는relf-renewal의보조인자(LIF)의
줄기세포관련원천기술구축을위해임신3.5일령의129SvJ 마우스에서배반포를채
존성을나타내지만, feeder cell이없는0.1% gelatin coating dish에서도잘자라는것으로
취한후, 마우스배아줄기세포를구축하고유지·배양하면서여러가지성상확인법을응용하
보아feeder cell 의존성은아님을알수있었다. 이는마우스배아암세포및마우스배아
여우리원에서작출한마우스배아줄기세포의특성을파악하여보았다. 2006년에구축된
줄기세포가0.1% gelatin에서도증식이가능함을보고한Hayashi(2007)의연구결과와도
마우스배아줄기세포에대하여telomerase 활성도시험법, 특이전사인자및표면항원검
일치한다. 효소학적성상확인(ALP, telomerase 활성도), 전사인자(Oct-4, Sox-2, Nanog)및
출에의한성상확인법을확립하였으며, 마우스배아줄기세포를마우스하배부피하및고
표면항원(SSEA-1, SSEA-4, TRA-1-60)을이용한성상확인법에의한주기별성상확인
환에직접접종하여teratoma의형성여부를판명하는teratoma 형성성상확인법을확립
결과를통해확립된마우스배아암세포는미분화된채로배아암세포고유의특징을지니
하였다. 이상에서확립된성상확인법을이용하여, 작출한마우스배아줄기세포를40대까지
고있는것으로판명되었다. 이상의결과를통해, 마우스배아암세포주가성공적으로확립
계대배양하면서5계대마다성상확인을해본결과마우스배아줄기세포는self-renewal의
되었으며, 우리원작출마우스배아줄기세포와상업적으로시판되는마우스배아줄기세포에
보조인자(LIF)가첨가된배지에서미분화상태로남아있었으며, 형태학적으로세포밀도가
의해유도된배아암세포간의차이는없는것으로판단된다.
치밀하고둥근형태의다층의응괴집락을형성하였다. 또한높은telomerase 활성도를나타
미분화된마우스배아줄기세포의분화유도를위한배상체작출법으로우리는Hanging
내었으며, ALP, SSEA-1, Nanog, Oct-4, Sox-4에는 양성을 나타내었으나, SSEA-4,
Drop법(HD법), Low attachment법(LA법), Conical tube법(CT법)을확립하고세가지방법
TRA-1-60에는면역염색결과음성으로판정되어배아줄기세포임을확인하였다. 또한고
간의배상체형성능, Heart-beating 현상, 세포내부구조등을비교하여보았다. 확립된3
환및피하에형성되었던teratoma는dendrocyte, neurocyte, glandular cell등삼배엽에서
가지기법의배상체형성능을비교시험한결과CT법및LA법은100%, HD법은96%로
유래한는 다양한 세포유형을 관찰할 수 있었다. 마우스 배아줄기세포임을 확인하기위해
세방법모두형성능에있어서는양호한결과를나타내었으나, 배양기간중Heart-beating
확립한성상확인법은미국국립보건원(National Institute for Health)에서권장하는지료를
현상관찰에있어서는HD법이82.5%로가장좋은결과를나타내었다. 투과전자현미경에
근거로하여확립하였다.(NIH, 2001; NIH, 2005) 이상의결과로미루어보아우리는마우스
의한배상체내부구조관찰을통해, 중심부는apoptosis 및necrosis가진행되며, 외부세
배아줄기세포가40계대까지성공적으로유지배양되었음을확인할수있다.
포들은microvili 및secretory vesicle이많이발달되고있음을알수있었다. 신경핵발현
마우스배아생식세포는생식세포가완전히분화되기이전인임신8일∼12.5일사이의마
물질NeuN, 표면항원물질SSEA-1 및SSEA-4에의한성상확인결과, 세가지방법에의
우스배아생식기융선(genital ridge)을사용하는것이일반적이다. Buehr(1997) 등의보고
한배상체모두양성을나타냄으로써마우스배상체임을확인할수있었다. 이상의결과
에의하면배아생식세포는배양도중쉽게분화가되거나세포주를구축하기에어려운것
를통해, 세가지방법에의한마우스배상체는형성능, 형태학적인특징은별차이가없으
으로인식되고있다. 따라서, 본연구에서는생식세포회수율을높이고자, 임신10.5일령
나, heart-heating 현상발현율은HD법에의한배상체가가장효과적임을알수있었다.
의 배아를 이용하였다. 배아의 생식기융선을 채취한 후, 생식세포에 대한 1차 항체
본결과는Hiroshi(2003)가시도한HD법에의한심박발현율보다도높은결과로서우리의
(anti-SSEA-1)와microbead가결합된2차항체를이용하여채취한결과물을배양한결과
시험법이좀더개선된방법임을알수있었다.
순수마우스배아생식세포만을얻을수있었다. 얻어진배아생식세포를계대배양하면서
간세포는단백질합성, 탄수화물및지질대사뿐만아니라, 다양한화학물질의해독에중
특성을파악하기위하여, 적정배지등유지배양조건을확립하였고, ALP 및표면항원, 전
요한역할을하고있다. 따라서, 간세포고유의특징을지니고있는세포주를유지하는것
사인자를이용한성상확인법등을확립하였다. 확립된방법들을이용하여분석한결과, 작
은화합물의in vitro 간독성평가의핵심요소가될수있다. 우리는확립된마우스배아
출한배아생식세포는feeder cell 및self-renewal의보조인자(LIF)하에서세포밀도가치
줄기세포주로부터간전구세포를유도하고, 확립된간전구세포를형태학적, 생화학적방법
밀하고둥근형태의다층의미분화상태를유지할수있었다. 또한ALP 및표면항원, 전사
들을이용하여특징을파악하여보았다.
인자를이용한주기별성상확인을통해작출한배아생식세포는미분화된상태로배아생식
간전구세포를 유도하기위해 마우스배아줄기세포는 feeder cell의 오염의 방지하기위해
세포고유의특성을나타내고있음을알수있었다. 그러나. 배아생식세포는feeder cell을
0.1% gelatin 코팅디쉬를이용해6번계대한후사용했다. 0.8% DMSO가포함된1차배
지속적으로요구하는점과collagen 등으로대체할수없어유지배양하기까다로운점등
양액으로4일간배양하고, 2.5mM sodium butyrate가함유된2차배양한후, 간전구세포의
은개선해야할사항이다.
마우스배아암세포의작출법은마우스배아줄기세포의접종부위및투여기간에따라여
관찰됨
러가지변형방법이있을수있으나, 본연구에서는투여부위를하배부(flank)피하와마
? 신경전구세포 특이 발현 단백질인 CK8(녹색형광)과 NESTIN(적색형광) 항원에 대해
우스고환을선택하였으며, 투여기간으로는45일, 57일, 60일을선택하였고공시세포로는
면역조직화학염색법으로 발현도를 확인한 결과 2차 분화배양 후 양성반응을나타내어
2006년우리원에서작출한마우스배아줄기세포와상업적으로판매되는마우스배아줄기세
포를 이용하였다. 일정시간 경과 후, 얻어진 teratoma조직을 1차 항체(anti-SSEA-1)와
배상체에서신경세포로분화중임을확인하였음
microbead가결합된2차항체를이용해마우스배아암세포만을순수분리하여유지배양하
였다. 적정배지조건을확립하고마우스배아줄기세포의성상확인법(Illmensee and Mintz,
Ⅴ. 고찰
1976; Martin, 1981)을준용하여작출한마우스배아암세포의특성을파악한결과, 투여
다장기분화능을지닌미분화된마우스배아줄기세포관련기술은다양한생명공학응용
부위및투여기간과상관없이모두teratoma가형성되었으며, 이teratoma를이용하여
연구가가능하기때문에생명과학기술의핵심으로여겨지고있으며, 이와관련된유지배
성공적으로배아암세포를작출할수있었다. 그러나투여부위중하복부피하보다는고환
양 기술 및 작출법 등은 다음 단계의 연구 진행을 위한 필수요건으로 여겨지고 있
에서뚜렷하고큰teratoma조직을관찰할수있었는데이는마우스고환조직이증식이
다.(Evans and Kaufman, 1981; Rippon and Bishop, 2004; Wobus, 2003)
왕성하기때문인것으로사료된다. 작출된배아암세포는relf-renewal의보조인자(LIF)의
줄기세포관련원천기술구축을위해임신3.5일령의129SvJ 마우스에서배반포를채
존성을나타내지만, feeder cell이없는0.1% gelatin coating dish에서도잘자라는것으로
취한후, 마우스배아줄기세포를구축하고유지·배양하면서여러가지성상확인법을응용하
보아feeder cell 의존성은아님을알수있었다. 이는마우스배아암세포및마우스배아
여우리원에서작출한마우스배아줄기세포의특성을파악하여보았다. 2006년에구축된
줄기세포가0.1% gelatin에서도증식이가능함을보고한Hayashi(2007)의연구결과와도
마우스배아줄기세포에대하여telomerase 활성도시험법, 특이전사인자및표면항원검
일치한다. 효소학적성상확인(ALP, telomerase 활성도), 전사인자(Oct-4, Sox-2, Nanog)및
출에의한성상확인법을확립하였으며, 마우스배아줄기세포를마우스하배부피하및고
표면항원(SSEA-1, SSEA-4, TRA-1-60)을이용한성상확인법에의한주기별성상확인
환에직접접종하여teratoma의형성여부를판명하는teratoma 형성성상확인법을확립
결과를통해확립된마우스배아암세포는미분화된채로배아암세포고유의특징을지니
하였다. 이상에서확립된성상확인법을이용하여, 작출한마우스배아줄기세포를40대까지
고있는것으로판명되었다. 이상의결과를통해, 마우스배아암세포주가성공적으로확립
계대배양하면서5계대마다성상확인을해본결과마우스배아줄기세포는self-renewal의
되었으며, 우리원작출마우스배아줄기세포와상업적으로시판되는마우스배아줄기세포에
보조인자(LIF)가첨가된배지에서미분화상태로남아있었으며, 형태학적으로세포밀도가
의해유도된배아암세포간의차이는없는것으로판단된다.
치밀하고둥근형태의다층의응괴집락을형성하였다. 또한높은telomerase 활성도를나타
미분화된마우스배아줄기세포의분화유도를위한배상체작출법으로우리는Hanging
내었으며, ALP, SSEA-1, Nanog, Oct-4, Sox-4에는 양성을 나타내었으나, SSEA-4,
Drop법(HD법), Low attachment법(LA법), Conical tube법(CT법)을확립하고세가지방법
TRA-1-60에는면역염색결과음성으로판정되어배아줄기세포임을확인하였다. 또한고
간의배상체형성능, Heart-beating 현상, 세포내부구조등을비교하여보았다. 확립된3
환및피하에형성되었던teratoma는dendrocyte, neurocyte, glandular cell등삼배엽에서
가지기법의배상체형성능을비교시험한결과CT법및LA법은100%, HD법은96%로
유래한는 다양한 세포유형을 관찰할 수 있었다. 마우스 배아줄기세포임을 확인하기위해
세방법모두형성능에있어서는양호한결과를나타내었으나, 배양기간중Heart-beating
확립한성상확인법은미국국립보건원(National Institute for Health)에서권장하는지료를
현상관찰에있어서는HD법이82.5%로가장좋은결과를나타내었다. 투과전자현미경에
근거로하여확립하였다.(NIH, 2001; NIH, 2005) 이상의결과로미루어보아우리는마우스
의한배상체내부구조관찰을통해, 중심부는apoptosis 및necrosis가진행되며, 외부세
배아줄기세포가40계대까지성공적으로유지배양되었음을확인할수있다.
포들은microvili 및secretory vesicle이많이발달되고있음을알수있었다. 신경핵발현
마우스배아생식세포는생식세포가완전히분화되기이전인임신8일∼12.5일사이의마
물질NeuN, 표면항원물질SSEA-1 및SSEA-4에의한성상확인결과, 세가지방법에의
우스배아생식기융선(genital ridge)을사용하는것이일반적이다. Buehr(1997) 등의보고
한배상체모두양성을나타냄으로써마우스배상체임을확인할수있었다. 이상의결과
에의하면배아생식세포는배양도중쉽게분화가되거나세포주를구축하기에어려운것
를통해, 세가지방법에의한마우스배상체는형성능, 형태학적인특징은별차이가없으
으로인식되고있다. 따라서, 본연구에서는생식세포회수율을높이고자, 임신10.5일령
나, heart-heating 현상발현율은HD법에의한배상체가가장효과적임을알수있었다.
의 배아를 이용하였다. 배아의 생식기융선을 채취한 후, 생식세포에 대한 1차 항체
본결과는Hiroshi(2003)가시도한HD법에의한심박발현율보다도높은결과로서우리의
(anti-SSEA-1)와microbead가결합된2차항체를이용하여채취한결과물을배양한결과
시험법이좀더개선된방법임을알수있었다.
순수마우스배아생식세포만을얻을수있었다. 얻어진배아생식세포를계대배양하면서
간세포는단백질합성, 탄수화물및지질대사뿐만아니라, 다양한화학물질의해독에중
특성을파악하기위하여, 적정배지등유지배양조건을확립하였고, ALP 및표면항원, 전
요한역할을하고있다. 따라서, 간세포고유의특징을지니고있는세포주를유지하는것
사인자를이용한성상확인법등을확립하였다. 확립된방법들을이용하여분석한결과, 작
은화합물의in vitro 간독성평가의핵심요소가될수있다. 우리는확립된마우스배아
출한배아생식세포는feeder cell 및self-renewal의보조인자(LIF)하에서세포밀도가치
줄기세포주로부터간전구세포를유도하고, 확립된간전구세포를형태학적, 생화학적방법
밀하고둥근형태의다층의미분화상태를유지할수있었다. 또한ALP 및표면항원, 전사
들을이용하여특징을파악하여보았다.
인자를이용한주기별성상확인을통해작출한배아생식세포는미분화된상태로배아생식
간전구세포를 유도하기위해 마우스배아줄기세포는 feeder cell의 오염의 방지하기위해
세포고유의특성을나타내고있음을알수있었다. 그러나. 배아생식세포는feeder cell을
0.1% gelatin 코팅디쉬를이용해6번계대한후사용했다. 0.8% DMSO가포함된1차배
지속적으로요구하는점과collagen 등으로대체할수없어유지배양하기까다로운점등
양액으로4일간배양하고, 2.5mM sodium butyrate가함유된2차배양한후, 간전구세포의
은개선해야할사항이다.
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